新的噬菌体、其组合物以及它们的制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109666654A(43)申请公布日2019.04.23(21)申请号201910060802.4(74)专利代理机构北京市隆安律师事务所(22)申请日2015.06.0911323代理人刘东方(62)分案原申请数据201510308565.02015.06.09(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)(83)生物保藏信息A61K35/76(2015.01)CCTCCNO：M20151412015.03.23A61P31/04(2006.01)CCTCCNO：M20151452015.03.23C12R1/92(2006.01)CCTCCNO：M20151462015.03.23(71)申请人菲吉乐科(南京)生物科技有限公司地址210000江苏省南京市建邺区嘉陵江东街18号南京国家广告产业园3栋16楼(72)发明人霍茨蒙德·曼德维尔权利要求书2页说明书28页序列表72页附图3页(54)发明名称新的噬菌体、其组合物以及它们的制备方法和应用(57)摘要本发明涉及微生物领域，本发明提供了新的沙门氏菌噬菌体、其组合物、它们的制备方法和应用，本发明所述新的沙门氏菌噬菌体为肌尾噬菌体BP-66(Myoviridaesp.BP-66)、保藏编号CCTCCNO：M2015146，肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)保藏编号CCTCCNO：M2015145，长尾噬菌体BP-12(Chilikevirussp.BP-12)保藏编号CCTCCNO：M2015141。本发明所述新的噬菌体为严格的烈性噬菌体且对宿主菌具有高毒性，具有较广的宿主范围，低浓度下依然对宿主菌具有高毒性；所述噬菌体的DNA无法编码可能引起潜在健康风险的蛋白；于培养液中室温下稳定存活，4℃下超过6个月；而且在非致病性细菌宿主上可较好增殖；可实现大规模工业生产。本发明所述沙门氏菌噬菌体能为噬菌体疗法的应用提供优良的菌株资源。CN109666654ACN109666654A权利要求书1/2页1.新的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)，其中肌尾噬菌体BP-63的保藏编号为CCTCCNO：M2015145。2.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)为SEQIDNO：2的核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的噬菌体，其特征在于，所述肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)不含毒力基因或不良基因。4.根据权利要求1或2所述的噬菌体，其特征在于，所述肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)不识别非致病性细菌。5.根据权利要求4所述的噬菌体，其特征在于，所述非致病性细菌包括肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)不可识别表9中57株非致病性细菌。6.根据权利要求1或2所述的噬菌体，其特征在于，所述肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)不识别非宿主性致病性细菌。7.根据权利要求6所述的噬菌体，其特征在于，所述非宿主性致病细菌为表10中184株致病性细菌。8.权利要求1-7任一所述肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)在制备裂解沙门氏菌的产品中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的沙门氏菌包括肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)可裂解表7中35株血清型沙门氏菌。10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述沙门氏菌包括肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)可裂解表8中22株不同血清型肠道沙门氏菌。11.权利要求1所述肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)的发酵方法：2-1)取肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-63)的菌落，接种到LB培养液中振荡得到宿主菌悬液；2-2)将菌悬液稀释转接到LB培养液，振荡培养至对数前期并测定其菌悬液浓度；2-3)调节肌尾噬菌体BP-63发酵初始pH值为2；2-4)采用火焰接种法接种，向LB培养液中分别接入噬菌体和对数期宿主菌液并发酵，发酵过程中通入无菌空气，并加入消泡剂；2-5)发酵结束后，将噬菌体与宿主菌的全部混合液取出并离心，上清液经真空抽气泵抽滤至无菌过滤器装置内，得到噬菌体发酵液并于4℃下保存，即得。12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述LB培养液的配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，pH7.0。13.一种噬菌体组合物，其特征在于，所述组合物包括肌尾噬菌体BP-6