一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115200968A(43)申请公布日2022.10.18(21)申请号202211136196.8C07K7/56(2006.01)(22)申请日2022.09.19C07K1/14(2006.01)C07K1/34(2006.01)(71)申请人深圳市环境科学研究院C07K1/16(2006.01)地址518001广东省深圳市罗湖区红桂路C07K1/36(2006.01)红桂一街50号环保大院(72)发明人陈建义冯杰刘瑛欧蕾鲍爽李智谢紫欣梁琦婷吴佳佳廖俊权吴申浩(74)专利代理机构深圳市智科友专利商标事务所44241专利代理师李苗苗(51)Int.Cl.G01N1/34(2006.01)G01N1/40(2006.01)C07D471/16(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图7页(54)发明名称一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法(57)摘要一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，旨在克服现有技术中蓝藻毒素标准品价格高、缺乏混合标准品、购买渠道少，影响蓝藻毒素监测检测的缺点，该方法包括：A、藻华水体的预处理；B、蓝藻毒素的富集浓缩：通过HLBplus小柱联合PGC柱的固相萃取柱进行富集浓缩，蓝藻毒素提取液先经过HLBplus小柱，再经过PGC柱；C、蓝藻毒素的洗脱：调整固相萃取柱的顺序，使洗脱液先经过PGC柱，再经过HLBPlus小柱；D、将含有蓝藻毒素的洗脱液吹干得到蓝藻毒素干粉。本发明根据蓝藻毒素的类别及特性，合理搭配固相萃取柱进行蓝藻毒素的富集浓缩、洗脱，得到的产物纯度高，适合制备多种蓝藻毒素的混合标准品。CN115200968ACN115200968A权利要求书1/1页1.一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法包括以下步骤：步骤A、藻华水体的预处理：将藻华水体通过超声处理后过滤，滤液中加入甲醇溶液，得到甲醇浓度为1%体积含量的蓝藻毒素提取液；步骤B、蓝藻毒素的富集浓缩：将步骤A中得到的蓝藻毒素提取液通过固相萃取柱进行富集浓缩，所述的固相萃取柱选择为：HLBplus小柱联合PGC柱，蓝藻毒素提取液先经过HLBplus小柱，再经过PGC柱；步骤C、蓝藻毒素的洗脱：将步骤B中含有富集浓缩的蓝藻毒素的固相萃取柱用氮气吹干，之后用洗脱液进行洗脱，得到含有蓝藻毒素的洗脱液；洗脱前，调整固相萃取柱的顺序，使洗脱液先经过PGC柱，再经过HLBPlus小柱；步骤D、将步骤C得到的含有蓝藻毒素的洗脱液用氮气吹干后，得到蓝藻毒素干粉。2.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤A中，超声处理藻华水体时，超声频率为40KHz，超声处理时间为30~60min；过滤采用的是0.45μm的再生纤维素滤膜；甲醇溶液选择色谱级纯度。3.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤B中的固相萃取柱在蓝藻毒素的富集浓缩前，通过以下步骤活化固相萃取柱：PGC柱先用二氯甲烷活化，HLBPlus小柱先用甲醇活化；在HLBPlus小柱下连接PGC柱后，再将PGC柱和HLBPlus小柱用去离子水活化。4.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤B中，PGC柱的规格为200mg/3mL，HLBPlus小柱的规格为粒径80A，孔径60μm。5.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤B中，蓝藻毒素提取液通过固相萃取柱时，设置蓝藻毒素提取液的流速为6mL/min。6.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤C中，用氮气吹干含有富集浓缩的蓝藻毒素的固相萃取柱时，设置氮气的流速为10~20mL/min。7.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤C中的洗脱液为：二氯甲烷、甲醇和甲酸的混合溶液；洗脱液中，二氯甲烷和甲醇的体积比为35:65，加入甲酸，使甲酸体积含量为0.5%。8.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤C中，洗脱液通过固相萃取柱时，设置洗脱液的流速为6mL/min。9.根据权利要求1所述的一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法，其特征在于，所述的步骤D中，得到的蓝藻毒素包括：CYN、NOD‑R、MC‑RR、MC‑LR、MC‑WR、MC‑LY、MC‑LW、MC‑LF、MC‑HtyR、MC‑HiLR、MC‑YR、MC‑LA和Anatoxin‑a。2CN115200968A说明书1/6页一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法技术领域[0001]本发明涉