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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101920021A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CNCN101920021101920021A(43)申请公布日2010.12.22(21)申请号201010130747.0(22)申请日2010.03.23(71)申请人中国人民解放军第三军医大学地址400038重庆市沙坪坝区高滩岩正街29号(72)发明人吴玉章杨曌(74)专利代理机构北京同恒源知识产权代理有限公司11275代理人赵荣之(51)Int.Cl.A61K48/00(2006.01)A61K39/295(2006.01)A61K39/29(2006.01)A61P31/20(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表3页附图2页(54)发明名称免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗及其制备方法(57)摘要本发明公开了免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗及其制备方法,该疫苗为HBcAg表位肽、HBsAg表位肽、HBeAg表位肽与LIGHT基因重组表达载体的复合物;HBcAg表位肽/HBsAg表位肽/HBeAg表位肽分别由表位HBcAg87-95/HBsAg172-180/HBeAg147-155与穿膜序列HIV-Tat49-57、内质网滞留信号序列KDEL和接头序列组成,穿膜序列位于氨基端,内质网滞留信号序列位于羧基端,表位与穿膜序列或内质网滞留信号序列之间以接头序列连接;该疫苗可成功进入细胞并靶向内质网,有效促进乙肝病毒蛋白抗原表位进入MHC-I类抗原递呈途径激发特异性CTL应答。CN1092ACN101920021ACCNN110192002101920022A权利要求书1/1页1.免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗,其特征在于:该疫苗为乙肝病毒核心抗原表位肽、乙肝病毒表面抗原表位肽、乙肝病毒e抗原表位肽与LIGHT基因重组表达载体的复合物;所述乙肝病毒核心抗原表位肽由乙肝病毒核心抗原表位HBcAg87-95、穿膜序列HIV-Tat49-57、内质网滞留信号序列KDEL和接头序列组成;所述乙肝病毒表面抗原表位肽由乙肝病毒表面抗原表位HBsAg172-180、穿膜序列HIV-Tat49-57、内质网滞留信号序列KDEL和接头序列组成;所述乙肝病毒e抗原表位肽由乙肝病毒e抗原表位HBeAg147-155、穿膜序列HIV-Tat49-57、内质网滞留信号序列KDEL和接头序列组成;在所述乙肝病毒核心抗原表位肽、乙肝病毒表面抗原表位肽和乙肝病毒e抗原表位肽中,穿膜序列均位于氨基端,内质网滞留信号序列均位于羧基端,表位与穿膜序列或内质网滞留信号序列之间均以接头序列连接。2.根据权利要求1所述免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗,其特征在于:所述接头序列为AAY。3.根据权利要求1所述免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗,其特征在于:所述乙肝病毒核心抗原表位肽、乙肝病毒表面抗原表位肽和乙肝病毒e抗原表位肽的摩尔比为1∶1∶1。4.根据权利要求1所述免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗,其特征在于:所述LIGHT基因重组表达载体是在真核表达载体PCI-neo中插入LIGHTcDNA全长序列而得到。5.权利要求1所述免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗的制备方法,其特征在于:在搅拌条件下,向溶解有LIGHT基因重组表达载体的磷酸盐缓冲液中滴加溶解有乙肝病毒核心抗原表位肽、乙肝病毒表面抗原表位肽和乙肝病毒e抗原表位肽的水溶液,滴加完毕后继续搅拌30分钟,再静置30分钟,即得。6.根据权利要求5所述免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗的制备方法,其特征在于:所述乙肝病毒核心抗原表位肽、乙肝病毒表面抗原表位肽和乙肝病毒e抗原表位肽的摩尔比为1∶1∶1。2CCNN110192002101920022A说明书1/6页免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种多价疫苗,特别涉及一种免疫增强型乙肝治疗性多价疫苗,还涉及该疫苗的制备方法。背景技术[0002]乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝的DNA病毒。乙型病毒性肝炎简称乙肝,是由HBV引起,主要通过血液、体液及母婴传播,具有慢性携带状态的传染病。目前世界上有3亿多人为慢性HBV感染,我国约占半数。此种感染容易发展为慢性肝炎和肝硬化,少数病例可转变为原发性肝细胞癌,是当前WHO公布的人类疾病死亡原因中居第9位的疾病。目前,慢性HBV感染主要采用抗病毒药物如α-干扰素和拉米夫定等进行治疗,但疗效都不甚理想。α-干扰素治疗慢性乙肝的近期应答率为40%~60%,用药后1年的应答率仅为20%~40%,且治疗时可发生与剂量相关的副作用。拉米夫定治疗慢性乙肝持续用药1年时,乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴转率为20%~25%,HBeAg血清转换率为15%~20%,治疗时间长易出现耐药及HBVDNA多聚酶基因酪氨酸-蛋氨酸-天门冬氨