利用地衣芽孢杆菌发酵生产果聚糖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102168121A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102168121A(43)申请公布日2011.08.31(21)申请号201010542460.9(22)申请日2010.11.15(71)申请人天津实发中科百奥工业生物技术有限公司地址300462天津市塘沽区经济技术开发区西区新圣路121号(72)发明人徐勇虎李睿颖国华王永乐刘云胡娅君刘晓鸥(74)专利代理机构天津市三利专利商标代理有限公司12107代理人刘英兰(51)Int.Cl.C12P19/04(2006.01)C12R1/10(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称利用地衣芽孢杆菌发酵生产果聚糖的方法(57)摘要本发明涉及一种利用地衣芽孢杆菌发酵生产果聚糖的方法，实施步骤如下：（1）孢子菌悬液的制备：将地衣芽孢杆菌TJZKBA10658接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2-4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子菌悬液，悬液中孢子含量约为105-106个，待用；（2）将上述孢子菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，得到液体种子；（3）将上述液体种子用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵温度30-40℃，溶氧控制在30-40%，发酵时间14-30h；（4）发酵结束后，将发酵液6000转/分钟离心15分钟除菌体，取上清液过分子量6000-8000道尔顿超滤膜，截留液浓缩喷粉，得到果聚糖产量为40-240g/L。本发明工艺简单，效率高、成本低，利于果聚糖的开发应用的推广。CN10268ACCNN110216812102168126A权利要求书1/1页1.一种利用地衣芽孢杆菌发酵生产果聚糖的方法，其特征在于实施步骤如下：（1）孢子菌悬液的制备：将地衣芽孢杆菌TJZKBA10658接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2-4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子菌悬液，悬液中孢子含量约为105-106个，待用；斜面培养基组成包括，单位1L：葡萄糖2g、酵粉5g、蛋白胨10g、琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值7.0；其中所用菌种：地衣芽孢杆菌TJZKBA10658；（2）将上述孢子菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括，单位1L：蔗糖20-60g、酵母粉4-8g、蛋白胨5-10g，用蒸馏水定容至1L，pH值7.0；将液体种子培养基于121℃、15分钟灭菌再冷却；然后按照体积百分比5-12%的接种量将孢子菌悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，500ml规格的摇瓶装液量是100ml，摇瓶于30-40℃、转速为120-200rpm的摇床上培养24小时，得到液体种子；（3）将上述液体种子用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括，单位1L：蔗糖100-500g、酵母粉4-8g、蛋白胨5-10g；MgSO40.1-0.4g、NaCl0.5-2.0g、K2HPO42-4g、KH2PO42-4g、MnSO40.2-1g、FeCl20.2-1g，用蒸馏水定容至3L，pH值5.0-8.0，将发酵罐培养基于121℃、15分钟灭菌再冷却；然后按照体积比5-12%的接种量将液体种子接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30-40℃，溶氧控制在30-40%，发酵时间14-30小时；（4）发酵结束后，将发酵液6000转/分钟离心15分钟除菌体，取上清液过分子量6000-8000道尔顿超滤膜，截留液浓缩喷粉，得到果聚糖levan。2CCNN110216812102168126A说明书1/4页利用地衣芽孢杆菌发酵生产果聚糖的方法技术领域[0001]本发明涉及一种发酵生产果聚糖的方法，特别涉及一种利用地衣芽孢杆菌发酵生产果聚糖（levan）的方法。背景技术[0002]levan（莱万）是一种具有广泛用途的胞外多糖，是果聚糖的一种，是由果糖残基包在球状结构里组成，以β-2,6糖苷键相连的D-果糖构成的多糖，分子式为（C18H32O16）n。许多微生物在自然环境中都能产生胞外多聚物(EPS)，果聚糖(levan)只不过是被发现的其中一种，这些胞外多聚物多数存在于湍急的小溪中。它们可以保护微生物避免干燥和毒性的侵蚀损害，并且可以储存碳源。果聚糖(levan)也可以从商品生产中的细胞碎片中被分离出来。在医药上，果聚糖(levan)可用作皮下注射用胆固醇，抗肿瘤、免疫调节剂、抗炎类药物和血浆的替代品。在食品上被用作双呋喃果糖、果糖、低聚果糖，还可用作乳化剂、包封剂、色素和香味剂及脂肪的替代品。[0003]levan早在100多年前就被发现了，由于它的性质区别于其他多糖，所以引起了人们极大的兴趣。一开始只是用在医学上并且用量很少，因为成本很高，人们致力于大规模生产果聚