赭曲霉毒素A的快速检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105543376A(43)申请公布日2016.05.04(21)申请号201610043741.7(22)申请日2016.01.24(71)申请人湖南科技大学地址411201湖南省湘潭市雨湖区石码头2号(72)发明人曾云龙刘婷黄昊文徐合意邓克勤易守军唐春然(74)专利代理机构张家界市慧诚商标专利事务所43209代理人高红旺(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/115(2010.01)权利要求书1页说明书3页序列表1页附图1页(54)发明名称赭曲霉毒素A的快速检测方法(57)摘要本发明涉及一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，该方法包括如下步骤：（A）使赭曲霉毒素A核酸适体（Apt）与单链信号探针DNA（ssDNA）杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品接触，当待测样品中有赭曲霉毒素A存在时，杂交链与赭曲霉毒素A反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶选择性地催化双链DNA水解成单核苷酸，而单链信号探针ssDNA不水解而保留下来；（D）在ssDNA诱导下，铜离子还原生成近红外荧光铜纳米粒子；检测体系荧光强度，从而测定待测样品中的赭曲霉毒素A的含量。该方法具有高灵敏度，操作简单，低成本等特点。CN105543376ACN105543376A权利要求书1/1页1.一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，其特征是，该方法包括如下步骤：（A）使赭曲霉毒素A核酸适体（Apt）和可与赭曲霉毒素A核酸适体杂交的单链信号探针DNA（ssDNA）杂交，形成杂交链；（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有赭曲霉毒素A存在时，杂交链选择性地与赭曲霉毒素A反应释放出单链信号探针ssDNA；（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，选择性地将双链DNA水解成单核苷酸，留下单链信号探针ssDNA；（D）利用赭曲霉毒素A核酸适体-赭曲霉毒素A结合体不能诱导铜离子还原生成近红外荧光的铜纳米粒子，只有单链信号探针ssDNA能够诱导铜离子还原成近红外荧光铜纳米粒子，检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的赭曲霉毒素A的含量。2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A的检测方法，其特征是，所述赭曲霉毒素A核酸适体为5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAC-3’。3.根据权利要求1或2所述的赭曲霉毒素A的检测方法，其特征是，所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTCCCATGCTCC-3’。4.一种赭曲霉毒素A的快速检测方法，还提供检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征是，其至少包括：赭曲霉毒素A核酸适体、可与赭曲霉毒素A核酸适体杂交的单链信号探针ssDNA、DNA扩增体系、核酸外切酶、铜离子还原检测体系。5.根据权利要求4所述的检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征是，所述赭曲霉毒素A核酸适体为5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAC-3’。6.根据权利要求4或5所述的检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征是，所述的单链信号探针DNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTCCCATGCTCC-3’。7.根据权利要求4所述的检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征是，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液、三磷酸脱氧单核苷酸混合物dNTP和Phi29DNA聚合酶；所述缓冲溶液由Tris-HCl、MgCl2、(NH4)2SO4组成。8.根据权利要求4所述的检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征是，所述核酸外切酶为ExoIII核酸外切酶。9.根据权利要求4所述的检测赭曲霉毒素A的试剂盒，其特征是，所述的铜离子还原检测体系中还原剂为抗坏血酸。10.一种可用于检测赭曲霉毒素A的赭曲霉毒素A核酸适体，其特征是，其碱基序列为5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACAC-3’。2CN105543376A说明书1/3页赭曲霉毒素A的快速检测方法技术领域[0001]本发明涉及纳米生物传感以及生物检测领域，具体地说，是提供一种赭曲霉毒素A的快速检测方法及检测试剂盒。背景技术[0002]赭曲霉毒素包括7种结构类似的化合物，结构通式：R1=Cl或H；R2=H、CH3或C2H5。其中赭曲霉毒素A(R1=C1，R2=H）毒性最大，在霉变谷物、饲料等最常见。[0003]赭曲霉毒素A是曲霉和青霉等真菌产生的，广泛污染小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍