高效氯氟氰菊酯半抗原的制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105732788A(43)申请公布日2016.07.06(21)申请号201610159906.7(22)申请日2016.03.21(71)申请人贵州勤邦食品安全科学技术有限公司地址550009贵州省贵阳市小河区小孟工业园标准厂房二期1#楼1-2楼(72)发明人冯才伟汪善良扶胜蔡韬陆苇谢体波刘红李平王大敏牛治存(51)Int.Cl.C07K14/435(2006.01)C07K14/765(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/531(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称高效氯氟氰菊酯半抗原的制备方法及应用(57)摘要本发明提供一种高效氯氟氰菊酯半抗原的制备方法和应用。本发明所提供的高效氯氟氰菊酯半抗原合成方法是以高效氯氟氰菊酯为原料与琥珀酸酐经一步反应合成制备获得，半抗原与载体蛋白偶联得到高效氯氟氰菊酯抗原。实验结果表明，本发明合成的高效氯氟氰菊酯半抗原的方法简单，所得到的高效氯氟氰菊酯半抗原产率和纯度都较高，利用本发明合成的半抗原与载体蛋白偶联获得的抗原对实验动物进行免疫，得到特异性好，灵敏度高的单克隆抗体，用该抗体建立的酶联免疫试剂盒和试纸条使用方便、经济实惠、检测方法高效、准确，可同时检测大批量的样本，能满足高效氯氟氰菊酯残留的现场监控和大量样本的筛查的需求。CN105732788ACN105732788A权利要求书1/2页1.一种用于检测高效氯氟氰菊酯残留的抗原，是由高效氯氟氰菊酯为原料与琥珀酸酐反应合成的半抗原与载体蛋白偶联得到，具有下述分子结构式：其中所述的高效氯氟氰菊酯为原料与琥珀酸酐的反应合成的半抗原的分子结构式为：所述的高效氯氟氰菊酯为原料与琥珀酸酐的反应合成的半抗原的合成方法包括以下步骤：1）以高效氯氟氰菊酯为原料，溶解于经干燥后的二氯甲烷中，通入氮气进行保护，得到溶液I；2）在溶液I中加入琥珀酸酐，常温下搅拌溶解；3）加入催化剂三氯化铝固体进行催化反应；4）TLC薄层板监测反应进行，直至没有原料，停止反应；5）硅胶柱净化，浓缩得到产物，即为半抗原；其中所述的载体蛋白为：牛血清蛋白、鼠血清蛋白、兔血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白；所述的高效氯氟氰菊酯为原料与琥珀酸酐的反应合成的半抗原的合成路线如下：。2.根据权利要求书1所述的一种用于检测高效氯氟氰菊酯残留的抗原，其特征在于：所述的高效氯氟氰菊酯与琥珀酸酐的反应摩尔比为1/1-1/3，催化剂三氯化铝固体与高效氯氟氰菊酯质量比为1%-5%。3.根据权利要求书1所述的一种用于检测高效氯氟氰菊酯残留的抗原的制备方法包括以下步骤：1）称取适量高效氯氟氰菊酯半抗原溶解于DMF溶液中，加入EDC和NHS水溶液，进行活化30分钟，得到溶液I；2）将载体蛋白溶于含30%DMF水溶液中,得到溶液II；将溶液I加入到溶液II中，进行偶联，得到溶液III；2CN105732788A权利要求书2/2页3）用0.02mol/LPB缓冲液透析溶液III，获得高效氯氟氰菊酯抗原，分装并于-20℃保存备用。4.根据权利要求书1所述的一种用于检测高效氯氟氰菊酯残留的抗原的应用包括：制备高效氯氟氰菊酯酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡。3CN105732788A说明书1/9页高效氯氟氰菊酯半抗原的制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及一种高效氯氟氰菊酯残留的半抗原的制备方法及应用。背景技术[0002]高效氯氟氰菊酯，英文名Lambda-Cyhalothrin，又称为爱克宁、λ-三氟氯氰菊酯，属拟除虫菊酯类，具有触杀作用的卫生杀虫剂，化学名称：α-氰基-3-苯氧苄基-3-(2-氯-3,3,3-三氯氟-1-丙烯基)-2,2-二甲基环丙烷羧酸酯(Z)-(1R,3R),S-酯及(Z),(1S,3S),R-酯的1:1混合物。具有触杀作用，是对环境卫生害虫极为有效的一种广效杀虫剂，具有击倒速度快、击倒力强，用药量少等优点。能消灭传播疾病的媒介害虫和防治各种卫生害虫。拟除虫菊酯类被称为是杀虫剂农药的一个新突破，是杀虫剂历史上的第三个里程碑。在农业生产上，用途广泛。[0003]高效氯氟氰菊酯属于神经毒剂，接触量大时会引起头痛、头晕、恶心、呕吐、双手颤抖，全身抽搐或惊厥、昏迷、休克等，故国家制定了严格的高效氯氟氰菊酯残留检测标准，以保障食品安全，消除潜在的食品安全隐患。如GB/T5009-2008《植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的鉴定》、GB/T19649-2006《粮谷中475种农药及相关化学平残留量的测定》、SN/T1117-2008《进出口食品中多种菊酯类农药残留量测定方法气相色谱法》，现行的残留检测方法是气相色谱法和高效液相色谱法，