检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的酶联免疫试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105759041A(43)申请公布日2016.07.13(21)申请号201511015747.5(22)申请日2015.12.31(71)申请人贵州勤邦食品安全科学技术有限公司地址550009贵州省贵阳市小河区小孟工业园标准厂房二期1#楼1-2楼(72)发明人谢体波陆苇刘红王大敏李平汪善良冯才伟何方洋(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/544(2006.01)G01N33/02(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的酶联免疫试剂盒(57)摘要本发明提供了一种检测呋喃唑酮代谢物残留的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有呋喃唑酮代谢物的酶标板、呋喃唑酮代谢物抗体、呋喃唑酮代谢物标准品溶液、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物液、终止液和复溶液。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的残留，具有检测快速、灵敏、特异性好、准确度高、检测成本低等特点，能够满足现场快速定性、定量检测的要求。CN105759041ACN105759041A权利要求书1/1页1.一种用于检测呋喃唑酮代谢物残留的酶联免疫试剂盒，由包被了呋喃唑酮代谢物抗体的酶标板、呋喃唑酮代谢物抗体、呋喃唑酮代谢物标准品溶液、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物液、终止液和复溶液组成，其中所述呋喃唑酮代谢物抗体是由呋喃唑酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠得到，所述呋喃唑酮代谢物半抗原由呋喃唑酮溶于硫酸溶液中，降温至0-4℃，缓慢加入10%亚硝酸钠溶液（降温至0-4℃），制备得到，偶联半抗原的载体蛋白可为牛血清蛋白，卵清蛋白，血蓝蛋白，人血白蛋白，甲状腺蛋白。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述呋喃唑酮代谢物标准品溶液浓度为0ng/L、1ng/L、3ng/L、6ng/L、18ng/L、36ng/L。2CN105759041A说明书1/6页检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的酶联免疫试剂盒技术领域[0001]本发明涉及食品安全快速检测领域，具体为一种检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的ELISA试剂盒及其制备方法。背景技术[0002]呋喃唑酮（Furazolidone，，曾用名称：痢特灵）是一种硝基呋喃类抗生素，可用于治疗细菌和原虫引起的痢疾、肠炎、胃溃疡等胃肠道疾患。呋喃唑酮为广谱抗菌药，对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌有抑制作用，包括沙门菌属、志贺菌属、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、金葡菌、粪肠球菌、化脓性链球菌、霍乱弧菌、弯曲菌属、拟杆菌属等，在一定浓度下对毛滴虫、贾第鞭毛虫也有活性，其作用机制为干扰细菌氧化还原酶从而阻断细菌的正常代谢，因其良好的抗菌作用和药动力学的特性，曾被广泛应用，作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以是实验动物发生癌变和基因突变，其在动物源性食品中的残留，可以通过食物链传递给人类，长期摄入会引起各种疾病，根据联合国粮食及农业组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)食品添加剂联合专家委员会的报告，呋喃唑酮及其代谢产物有致癌性，且易产生抗药菌株，容易引起畸胎。中华人民共和国农业部将呋喃唑酮列为禁止使用的药物，不得在动物性食品中检出。FDA于2002年禁止了硝基呋喃类（包括呋喃唑酮）在动物性食品中的使用。[0003]呋喃唑酮进入动物体内很快会代谢，成为呋喃唑酮代谢物，且呋喃唑酮代谢物对人体有着与呋喃唑酮同样的危害，而在组织中结合的呋喃代谢产物则能存留较长一段时间，所以在实际检测中，监督管理部门以检测代谢产物为目标实现检测硝基呋喃类残留的目的。呋喃唑酮代谢产物为AOZ。[0004]目前，检测呋喃唑酮代谢物的最常用方法是LC-UV、LC-MS和LC-MS/MS，仪器方法准确度高、特异性好，但是仪器昂贵、依赖于专业检测技术人员，难以满足快检要求，酶联免疫方法结合了色谱技术，操作简单、检测时间短，适用于大量样本筛查，检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物残留量。发明内容[0005]本发明的一个目的是提供一种检测呋喃唑酮代谢物残留的酶联免疫试剂盒，该检测试剂盒操作简便、检测时间短、反应灵敏度高。[0006]本发明所提供的试剂盒包括包被有偶联抗原的酶标板、呋喃唑酮代谢物标准品、呋喃唑酮代谢物高浓度标准品、酶标二抗、抗体浓缩液、底物液A液、底物液B液、终止液和浓缩复溶液、浓缩洗涤液、2-硝基苯甲醛。[0007]所述呋喃唑酮代谢物抗体是由呋喃唑酮代谢物半抗原-载体蛋白偶联物，免疫小鼠得到，所述呋喃唑酮代谢物半抗原由呋喃唑酮溶于硫酸溶液中，降温至0-4℃，缓慢加入10%亚硝酸钠溶液（降温至0-4℃），制备得到。向溶液中加入溶