一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105837699A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610202595.8A61P31/04(2006.01)(22)申请日2016.04.05A61P1/00(2006.01)A61P39/02(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20141702014.04.28(71)申请人南昌大学地址330031江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号(72)发明人魏华张志鸿许恒毅何丽华陶雪莹徐锋江美玲(74)专利代理机构南昌新天下专利商标代理有限公司36115代理人施秀瑾(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)A61K31/715(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图3页(54)发明名称一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途(57)摘要本发明提供了一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途。该多糖以制备方法表征，由于匹配了温和的纯化条件，因此其分子结构得到有效保留，所得产物结构成分单一、结构明确，同时具有较高的纯度和收率。此外，本发明通过实验手段意外发现，在该植物乳杆菌胞外多糖存在条件下，蜡样芽孢杆菌肠毒素对小肠上皮细胞的毒性受到明显抑制，具体表现为小肠上皮细胞活力得到有效保持，而且这种保护作用具有一定的广谱性。基于该植物乳杆菌胞外多糖的以上新性质，本发明确定了其作为蜡样芽孢杆菌肠毒素拮抗剂、乃至蜡样芽孢杆菌肠毒素中毒治疗药物的新用途，其疗效确切，起效快速，具有广阔的应用前景。CN105837699ACN105837699A权利要求书1/1页1.一种植物乳杆菌胞外多糖，其特征在于所述植物乳杆菌胞外多糖是通过以下方法制备的：1)取植物乳杆菌发酵液，固液分离取上清；2)向步骤1)所述上清液中加入乙醇，醇沉，固液分离取沉淀，以8～14KDa截留分子量的透析袋透析，取透析袋内容物干燥，即为粗多糖；3)以含有40～60mMTris-HCl、5～15mMMgSO4·7H2O的溶液作为粗多糖溶解液，溶解步骤2)所述粗多糖，而后加入核酸酶DNAsetype-I至终浓度2～3μg/mL，水解；4)而后加入蛋白酶PronaseE至终浓度40～60μg/mL，酶解；5)而后加入三氯乙酸至终浓度10～15％(w/v)，20～40min后固液分离取上清，透析，取透析袋内容物即为所述植物乳杆菌胞外多糖。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中乙醇的加入量是所述上清液体积的1.5～2.5倍。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)中粗多糖的终浓度为4～6mg/L。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤5)透析前，先调节上清液pH至4～5，再透析。5.根据权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的植物乳杆菌，是保藏编号为CCTCCM2014170的植物乳杆菌。6.权利要求1所述植物乳杆菌胞外多糖用于抑制蜡样芽孢杆菌肠毒素对小肠上皮细胞毒性的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述蜡样芽孢杆菌肠毒素是细胞毒素K。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述蜡样芽孢杆菌肠毒素是溶血性肠毒素HBL。9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述蜡样芽孢杆菌肠毒素是非溶血性肠毒素Nhe。10.权利要求1所述植物乳杆菌胞外多糖用于制备蜡样芽孢杆菌肠毒素中毒治疗药物的应用。2CN105837699A说明书1/7页一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途技术领域[0001]本发明涉及微生物技术领域，进一步涉及微生物代谢产物的分离纯化及其医药用途，具体涉及一种植物乳杆菌胞外多糖及其用于拮抗蜡样芽孢杆菌肠毒素毒性的用途。背景技术[0002]乳酸菌胞外多糖(Exopolysaccharide，EPS)，泛指乳酸菌代谢过程中分泌到细胞外的糖类化合物。由于乳酸菌胞外多糖具有良好的流变性、而且能赋予发酵食品良好的口感和风味，因此可作为食品工业的胶凝剂、稳定剂、保鲜剂和乳化剂等，目前已广泛用于乳制品、饮料、糕点、糖果、冰激凌等食品的生产。此外，有研究表明EPS具有抗肿瘤、降低胆固醇、延缓衰老、调节肠道菌群平衡等作用，因此EPS可能是乳酸菌益生作用的物质基础之一。[0003]植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)，属同型发酵乳酸菌，革兰氏阳性，兼性好氧。该菌株被证明具有耐酸、耐胆盐、抗致病菌、调节肠道菌群平衡的作用，同时有研究表明上述耐酸能力及益生作用可能与其胞外多糖有关。植物乳杆菌胞外多糖呈混杂形式存在，并非性质均一的单一化合物；而多糖作为分子结构复杂且庞大的糖类物质，无论由糖单位种类和次序所决定的一级