一种快速检测中药材中桔霉素含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105954422A(43)申请公布日2016.09.21(21)申请号201610411627.5(22)申请日2016.06.12(71)申请人肇庆学院地址526061广东省肇庆市端州区东岗肇庆学院(72)发明人刘艳清汪洪武姚夙严子军韦寿莲黄晓真(74)专利代理机构广州三环专利代理有限公司44202代理人刘宇峰(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种快速检测中药材中桔霉素含量的方法(57)摘要本发明属于分析测试技术领域，涉及桔霉素的检测方法，尤其是涉及一种快速检测中药材中桔霉素含量的方法。本发明所述方法包括以下步骤：改进的QuEChERS法萃取；采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对待测液进行检测；桔霉素标准溶液的配制；桔霉素定性定量方法的建立。待测样品经QuEChERS萃取、超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(UPLC-MS/MS)分析，采用外标法，在电喷雾离子源电离和多反应监测模式条件下进行定量测定。实验结果表明，本方法灵敏度高、稳定性好，适用于大量样品中桔霉素残留的准确快速检测，适用于中药材中桔霉素残留的监测。CN105954422ACN105954422A权利要求书1/1页1.一种快速检测中药材中桔霉素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)QuEChERS萃取：取5.00g中药材样品，粉碎研磨，得粒径为0.02mm的样品粉末，加入100mL锥形瓶中；容量瓶中配制50mL乙腈-水(体积比为75:25)溶液，加入到所述锥形瓶中，350r/min震荡25min，静置沉淀，过滤，取上清液过净化柱，浓缩过0.22μm滤膜后待测；(2)采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对待测液进行检测；色谱条件为：采用ACQUITYUPLCBEHC18(50mm×2.1mm×1.7μm)色谱柱；流动相为80％乙腈和20％5mM乙酸铵缓冲盐溶液；进样体积：10.0μL；流速：0.3mL/min；柱温40.0℃；样品室温度：25.8℃；质谱条件为：采用WatersXEVOTQD三重四级杆质谱联用仪；电喷雾离子源为正离子模式(ESI+)，扫描方式选用多反应监测(MRM)，毛细管电压为3.5kV，离子源温度设为152℃，脱溶剂气温度为597℃，脱溶剂气流量1000L/h，锥孔气流速1L/h，雾化压力0.5MPa，碰撞气流速为0.2mL/min；桔霉素(CIT)的质谱(MS/MS)参数设置：母离子：m/z251.1；锥孔电压45V；碎片离子1：m/z157.0，碰撞电压23V；碎片离子2：m/z189.0，碰撞电压12V；碎片离子3：m/z233.2，碰撞电压14V；(3)桔霉素标准溶液的配制：准确称取5.0mg桔霉素(CIT)标准品于100.00mL容量瓶中，用乙腈-水(体积比为6:4)溶液定容，配制成50.0mg/L的储备液，密封储存于-4℃冰箱中备用；(4)桔霉素定性定量方法的建立：取出桔霉素标准溶液的储备液，逐级稀释成质量浓度梯度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0ng/mL的标准溶液，采用步骤(2)所述方法进行测定，以质量浓度为横坐标x，以峰面积为纵坐标Y，绘制出桔霉素标准工作曲线；从所述标准工作曲线中求出待测样品中桔霉素的含量。2CN105954422A说明书1/5页一种快速检测中药材中桔霉素含量的方法技术领域[0001]本发明属于分析测试技术领域，涉及桔霉素的检测方法，尤其是涉及一种快速检测中药材中桔霉素含量的方法。背景技术[0002]桔霉素(Citrinin，CIT)也叫桔青霉素，是青霉属和曲霉属的某些菌株产生的真菌毒素，具有抑菌性、肾毒性、致癌和致畸性，主要产生于青霉、曲霉、红曲霉的代谢过程，在谷物、水果、肉类及其相关制品中都有存在。随着时代的发展，食品中枯霉素的污染日益严重，人类在长期食用送些被污染的食品后，枯霉素会在体内大量累积，造成肾器病变，甚至导致崎形和肿瘤，对人们的身体健康产生重大威胁。[0003]目前，桔霉素主要的检测手段有液相色谱法、酶联免疫法、薄层层析法和液相色谱与质谱联用法。其中，液相色谱法灵敏度达不到要求范围内，检出限较高，荧光检测，检测过程复杂。酶联免疫法检测快速，但由于其使用的酶极不稳定，导致假阳性率比较高，对定性和定量都有显著地影响。液相色谱与质谱联用法可同时提供目标化合物的保留时间和分子结构信息，具有杂质影响小，不需要衍生就能够准确对目标物进行定性和定量。[0004]QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)，是近年来国际上最新发展起来的一种用于农产品