强力霉素快速检测试剂盒及其制备、使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106290927A(43)申请公布日2017.01.04(21)申请号201610592109.8(22)申请日2016.07.26(83)生物保藏信息CCTCCNO:C2016802016.05.20(71)申请人鲁东大学地址264002山东省烟台市芝罘区红旗中路186号鲁东大学(72)发明人王晓洁李楠(74)专利代理机构烟台双联专利事务所(普通合伙)37225代理人牟晓丹(51)Int.Cl.G01N33/94(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图5页(54)发明名称强力霉素快速检测试剂盒及其制备、使用方法(57)摘要本发明涉及抗生素检测技术的改进，具体涉及强力霉素快速检测试剂盒及其制备、使用方法，属于免疫学领域。强力霉素快速检测试剂盒，包括自下而上排列的支撑体、吸水层3、检测层2、带通孔1的盖板4，保藏号为：CCTCCNO:C201680杂交瘤细胞DC-C所分泌的、胶体金标记的抗强力霉素单克隆抗体C；A液：含1-5％分子量为20000的PEG的0.01mol/L磷酸盐缓冲液；B液：含0.01-0.25％吐温-20的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。该试剂盒具有简便、快速、准确、灵敏的特点,最低检测浓度为2ug/ml，可用于现场对强力霉素药物残留的粗筛检测。CN106290927ACN106290927A权利要求书1/1页1.强力霉素快速检测试剂盒，其特殊之处在于包括自下而上排列的支撑体、用于快速吸收检测试剂的吸水层(3)、由硝酸纤维素膜制成的检测层(2)、带通孔(1)的盖板(4)，保藏号为：CCTCCNO:C201680杂交瘤细胞DC-C所分泌的、胶体金标记的抗强力霉素单克隆抗体C(简称：金标单抗C)；A液：含1-5％分子量为20000的聚乙二醇(PEG20000)的0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)；B液：含0.01-0.25％吐温-20的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。2.根据权利要求1所述强力霉素快速检测试剂盒，其特征在于：所述的金标单抗C：是由小分子半抗原强力霉素(DC)与牛血清白蛋白(BSA)通过戊二醛法偶联合成的强力霉素-牛血清白蛋白(DC-BSA)完全抗原，将其作为免疫原而制备的抗强力霉素单克隆抗体，经胶体金标记后而致。3.根据权利要求1所述强力霉素快速检测试剂盒，其特征在于：所述的金标单抗C，其制备方法如下：(1)、制备胶体金溶液，制得的胶体金的颗粒大小为18-20nm；(2)、将单克隆抗体C(3g/L抗体蛋白)，按200μl-3ml加入到上述的100ml胶体金溶液中，慢搅混匀；(3)、向混合溶液中加入PEG20000，使其终浓度为1-5％，静置过夜；(4)、离心8000-10000转/分，1-1.5小时，弃上清；(5)、取离心沉淀，用含有0.05-0.25％吐温-20、0.02％叠氮化钠的0.01mol/L磷酸盐缓冲液悬起，制成金标单抗C。4.按照权利要求3所述的强力霉素快速检测试剂盒，其特征在于步骤(1)中所述胶体金溶液的制备方法为按一定的配比将氯金酸与柠檬酸三钠混合并加热制备成胶体金溶液。5.按照权利要求3所述的强力霉素快速检测试剂盒，其特征在于步骤(2)中单克隆抗体C与胶体金溶液慢搅混匀30-60min。6.强力霉素快速检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括以下步骤：将待测样品滴加到硝酸纤维素膜上，晾干，然后加A液渗入，加金标单抗C渗入，加B液渗入，5-10分钟，便可在硝酸纤维素膜上显示检测结果。7.按照权利要求6所述的强力霉素快速检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括以下步骤：(1)取待测溶液5μl，点在盖板(4)的通孔(1)中的硝酸纤维素膜上，晾干；(2)在其上加含1-5％PEG20000的0.01mol/LPBS的A液100μl渗入，进行封闭；(3)加入100μl金标单抗C，渗入；(4)加入含0.05-0.25％吐温-20的0.01mol/LPBS的B液100μl渗入；(5)结果显示：硝酸纤维素膜上出现红色斑点为阳性，表示检测到有强力霉素残留，无红色斑点为阴性，表示检测不到强力霉素或者强力霉素浓度低于2ug/ml。2CN106290927A说明书1/5页强力霉素快速检测试剂盒及其制备、使用方法技术领域[0001]本发明涉及抗生素检测技术的改进，具体涉及强力霉素快速检测试剂盒及其制备、使用方法，属于免疫学领域。背景技术[0002]机制与四环素相同，主要是干扰敏感菌的蛋白质合成。它可以特异性地与细菌核糖体30S亚基在A位置结合，从而抑制氨基酰-tRNA在该位置上的联结，阻止肽链的延长；强力霉素还可以改变细菌细胞膜的通透性，使细胞内的核苷酸及其他重要成分漏出，从而抑制细菌D