基于三柱二维液质联用法测定肉制品中残留磺胺类药物的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106546671A(43)申请公布日2017.03.29(21)申请号201610903534.4(22)申请日2016.10.17(71)申请人浙江省食品药品检验研究院地址310052浙江省杭州市滨江区平乐街325号(72)发明人罗金文陈万勤周霞刘柱梁晶晶丁宇琦徐潇颖赵超群傅红雪(74)专利代理机构杭州浙科专利事务所(普通合伙)33213代理人周红芳(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书3页说明书8页附图2页(54)发明名称基于三柱二维液质联用法测定肉制品中残留磺胺类药物的方法(57)摘要本发明公开了基于三柱二维液质联用法测定肉制品中残留磺胺类药物的方法，它通过配制样品溶液、线性溶液、空白溶液及加标回收试验样品溶液，利用三柱二维液质联用法和内标法，利用在线柱切换液相-质谱联用技术，实现磺胺类药物残留的在线净化目的，大大提高了检测效率，降低了实验人员的劳动强度，解决了传统分析技术多种磺胺类药物操作繁琐的前处理方法、样品检测周期长、手工预处理的杂质干扰大、重现性难以保证以及多种磺胺类药物同时分析时很难满足待测药物均取得很好的定性定量效果的问题，能提升兽药残留的检测能力，为分析决策提供先进技术支撑。CN106546671ACN106546671A权利要求书1/3页1.基于三柱二维液质联用法测定肉制品中残留磺胺类药物的方法，其特征在于包括如下步骤：1）混合标准品工作溶液的配制：分别精密移取0.1mL1.0mg/mL的各磺胺类药物储备液至10mL容量瓶中，用甲醇定容，再精密移取1mL混合液至另一10mL容量瓶中，用甲醇定容，制成1mg/L的混合标准品工作溶液，于4℃下保存备用；2）同位素内标工作溶液的配制：精密移取0.1mL1.0mg/mL的内标储备液至10mL容量瓶中，用甲醇定容，再精密移取0.1mL定容的容量瓶中内标储备液至50mL容量瓶中，用甲醇定容，制得20ng/mL的内标工作溶液，于4℃下保存备用；3）样品溶液的制备：取待测肉制品，置50mL高速离心管中，精密加入步骤2）得到的同位素内标工作溶液和复合溶剂，高速匀浆1-3min，于3500-4500r/min离心4-6min，取上清液15mL氮气吹干，残渣用10%甲醇水溶液复溶，制得样品溶液备用；4）线性溶液的制备：称取不含磺胺类药物的肉制品，置50mL高速离心管中，精密加入复合溶剂，高速匀浆1-3min，于3500-4500r/min离心4-6min，取上清液15mL氮气吹干，残渣用10%甲醇水溶液复溶，制得空白基质溶液，精密吸取不同量的步骤1）制得的混合标准品工作溶液和相同量的步骤2）制得的同位素内标工作溶液，由空白基质溶液稀释得到各磺胺药物浓度分别为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL，内标浓度均为2ng/mL的线性标准溶液，供色谱测定；5）空白溶液的制备：取不含磺胺类药物的样品，置50mL高速离心管中，精密加入步骤2）得到的同位素内标工作溶液和复合溶剂，高速匀浆1-3min，于3500-4500r/min离心4-6min，取上清液15mL氮气吹干，残渣用10%甲醇水溶液复溶，制得空白溶液，供色谱测定；6）加标回收试验样品溶液的制备：取不含磺胺类药物的样品，置50mL高速离心管中，精密加入不同量的步骤1）制得的的混合标准品工作溶液，获得检出限为1ng/mL、定量限为2ng/mL、低、中、高不同水平浓度分别为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的加标试验样品，再向该加标试验样品中精密加入100µL步骤2）制得的同位素内标工作溶液，精密加入15-25mL复合溶剂，高速匀浆1-3min，于3500-4500r/min离心4-6min，取上清液15mL氮气吹干，残渣用10%甲醇水溶液复溶，制得加标回收试验样品溶液，供色谱测定；7）用三柱二维液质联用法测定样品溶液、线性溶液、空白溶液及加标回收试验样品溶液a测定：进样过程：由自动进样器分别吸取5μL样品溶液、线性溶液、空白溶液及加标回收试验样品溶液注入色谱仪中，以三柱二维液质联用法，测定样品溶液中的目标化合物峰面积、内标化合物峰面积；线性溶液中目标化合物峰面积、内标化合物峰面积；加标回收试验样品溶液中目标化合物峰面积、内标化合物峰面积，空白溶液在目标化合物出峰处无干扰，标准工作溶液及试样溶液中待测组分的响应值均应在监测器的线性范围之内；b曲线方程斜率、曲线方程截距的计算以线性溶液中的目标化合物峰面积比内标化合物峰面积定量，得到曲线方程A=aC+b，式中C为溶液中目标化合物残留量，单位为ng/mL；A为目标化合物峰面积比内标化合物峰面积比；a为