一种正相液相色谱‑串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106908551A(43)申请公布日2017.06.30(21)申请号201710339625.4(22)申请日2017.05.15(71)申请人中国烟草总公司郑州烟草研究院地址450001河南省郑州市高新区枫杨街2号(72)发明人余晶晶蔡君兰王冰秦亚琼刘克建赵晓东薛聪刘绍锋张晓兵(74)专利代理机构郑州中民专利代理有限公司41110代理人姜振东(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种正相液相色谱-串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法(57)摘要一种正相液相色谱-串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：首先对口含烟中的烟碱进行提取，采用手性色谱柱实现烟碱旋光异构体的分离，柱后高压输液泵引入异丙醇并进行分流，结合串联质谱进行分析测定，从而实现口含烟中S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的分离及灵敏检测。本发明的特点及有益效果如下：采用柱后高压输液泵引入异丙醇并分流，减少了进入质谱的非极性溶剂的量，同时补偿了极性溶剂异丙醇的量，提高了离子化效率，从而满足了液相色谱串联质谱分析的要求，并提高了分析的灵敏度；与现有方法相比，本发明两种烟碱旋光异构体的色谱分离度高（保留时间相差1min）；分析时间短（仅需17min）。CN106908551ACN106908551A权利要求书1/1页1.一种正相液相色谱-串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：首先对口含烟中的烟碱进行提取，采用手性色谱柱实现烟碱旋光异构体的分离，柱后高压输液泵引入异丙醇并进行分流，结合串联质谱进行分析测定，具体步骤如下：a、口含烟中烟碱的萃取：首先对口含烟进行预处理，称取处理后的口含烟样品0.1~0.5g，加入1~5mL5.0%NaOH溶液，静置5~30min，准确加入含有内标的正己烷溶液10~50mL，超声萃取5~30min，取上层清液过有机相滤膜，有机相滤膜上加有1~3.0g无水硫酸钠，净化后的样品溶液进正相液相色谱-串联质谱分析；b、样品的分析：液相色谱条件：采用正相液相色谱-串联质谱分析，所用色谱柱为手性色谱柱；柱温：30oC；流动相A：含有碱性添加剂的正己烷，流动相B：异丙醇；等度洗脱；流速0.5~1.0mL/min；进样体积10μL，分析时间为17min；柱后加入异丙醇及分流：在柱后通过三通阀连接，采用安捷伦高压输液泵引入异丙醇，控制异丙醇流速，同时，采用离子源上配置的三通阀进行柱后分流，通过控制PEEK管的长度，控制分流比；离子源：电喷雾电离源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾电压：5000V；气帘气压力：30psi；辅助气1压力：70psi；辅助气2压力：70psi；离子源温度：550oC。2.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：所述口含烟包括以下类型口含烟：袋装口含烟、含化型口含烟、胶基型口含烟；所述口含烟预处理方式如下：袋装口含烟直接剪碎，含化型口含烟碾磨成粉，胶基型口含烟碾成片状并剪碎。3.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：步骤a中，采用外消旋的d3-烟碱为内标，d3-S-(-)-烟碱和d3-R-(+)-烟碱合并计算，浓度范围为1~10mg/mL。4.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：步骤b中，所述的手性色谱柱为大赛璐手性色谱柱CHIRALPAK®IC，规格为4.6mm×250mm，i.d.5µm。5.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：所述碱性流动相添加剂为二乙胺，添加量为正己烷质量的0.02%~0.2%。6.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：所述的等度洗脱条件为A:B=95：5。7.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：柱后加入异丙醇流速为0.1~1.0mL/min。8.根据权利要求1所述的检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法，其特征在于：柱后分流比例为1:3~1:5。2CN106908551A说明书1/4页一种正相液相色谱-串联质谱法检测口含烟中烟碱旋光异构体的方法技术领域[0001]本发明属于复杂样品中手性异构体分离、分析检测技术研究，具体涉及一种正相液相色谱-串联质谱法分析口含烟中烟碱旋光异构体的方法，主要是针对不同类型口含烟样品，对烟碱进行提取，采用手性色谱柱实现烟碱旋光异构体的分离，柱后高压输液泵引入异丙醇并进行分流，结合串联质谱分析，实现了口含烟中S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的分离及灵敏检测。背景技