一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107037020A(43)申请公布日2017.08.11(21)申请号201710248305.8(22)申请日2017.04.17(71)申请人吉林化工学院地址132022吉林省吉林市龙潭区承德街45#(72)发明人曹雪玲刘发现罗亚楠(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书2页附图2页(54)发明名称一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒(57)摘要本发明涉及一种检测肉制品中残留盐酸克伦特罗的检测方法及检测试剂盒，该方法采用金纳米簇作为荧光响应试剂，通过盐酸与亚硝酸钠生成的亚硝酸与盐酸克伦特罗进行重氮化反应后引起金纳米簇荧光变化，通过紫外灯照射，进行颜色比对。此发明所提供的方法可以准确、快速地检测盐酸克伦特罗，试剂种类少，用量少，经济适用，可以满足肉制品快速检测需求，便于推广。CN107037020ACN107037020A权利要求书1/1页1.一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：采用金纳米簇作为荧光响应试剂（试剂A），通过盐酸（试剂B）与亚硝酸钠（试剂C）生成的亚硝酸，待测物中盐酸克伦特罗与亚硝酸反应，得到盐酸克伦特罗的重氮化衍生物，盐酸克伦特罗重氮化衍生物会引起金纳米簇荧光猝灭，通过紫外灯照射，与空白试剂进行颜色比对。2.如权利要求书1所述的，一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：试剂B与试剂C的体积比是1：1。3.如权利要求书1所述的，一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：检测温度为室温。4.如权利要求书1所述的，一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：紫外灯波长为365nm。5.如权利要求书1所述的，一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：试剂A作为底液。6.如权利要求书1所述的，一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：试剂A，试剂B和试剂C不加入盐酸克伦特罗样品做空白样，比对颜色。7.如权利要求书1所述的，一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其特征在于：试剂B与试剂C现用现混合。2CN107037020A说明书1/2页一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及瘦肉精检测技术领域，具体涉及一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒。背景技术[0002]盐酸克伦特罗是一种人工合成的β-肾上腺素类兴奋剂，俗称“瘦肉精”，开始是用于治疗支气管哮喘病，特别是慢性病的治疗。20世纪80年代，美国研究人员发现高剂量使用盐酸克伦特罗可以促进动物组织生长，提高瘦肉率和分解脂肪的作用。随后，该药物就被广泛的应用于牲畜和家禽生产中。但是，后来的研究表明，盐酸克伦特罗极易在牲畜和家禽体内蓄积，当人们长期食用残留盐酸克伦特罗的肉制品后，会出现头痛、胸闷、心悸、四肢麻木等不良反应，严重者可以危及生命。所以，为了保证食品的安全，建立一种高效、灵敏、简单、特异性强的盐酸克伦特罗残留检测方法具有重要的现实意义。[0003]目前关于盐酸克伦特罗的检测方法的报道，主要包括：酶联免疫吸附法(ELISA)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、电泳法、电化学法、高效液相色谱法（HPLC）及高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS）等，而GC-MS法在进样前需要衍生化，操作较复杂；而检测限较低，虽然HPLC-MS有较好的灵敏度，但是因为仪器昂贵，前处理复杂，一般实验室难以满足检测的要求。其中ELISA试剂盒是目前检测克伦特罗常用的方法，但是ELISA试剂盒一般都是半微量的，而且需要选择特定抗体进行酶联免疫，并且需要反复洗涤以除去未反应的物质，操作十分繁琐。发明内容[0004]本发明提供一种简单、准确的肉制品中残留盐酸克伦特罗的检测方法及检测试剂盒，用于实际样品中盐酸克伦特罗检测，证明其可操作性良好。[0005]一种盐酸克伦特罗的检测试剂盒，其具体步骤如下。[0006]金纳米簇溶液作为检测底液。[0007]盐酸溶液与亚硝酸钠溶液反应，生成亚硝酸，可以与盐酸克伦特罗进行重氮化反应。[0008]盐酸克伦特罗的重氮化合物可以引起检测试剂金纳米簇的荧光猝灭，并可以通过365nm的紫外灯照射下，观察其颜色变化。[0009]金纳米簇底液中加入盐酸及亚硝酸钠，不加入样品作为空白样进行颜色对照。[0010]检测温度为室温。[0011]盐酸溶液与亚硝酸钠溶液的体积比是1：1。[0012]把肉制品样品绞碎，加入碳酸钠溶液和乙酸乙酯，涡旋混匀10min，置入高速离心机中离心处理，取上清液，然后把盐酸加入到上清液中，充分混匀，离心分离有机层，备用。[0013]实际样品中盐酸克伦特罗经碳酸钠溶液和乙酸乙酯提取后加入盐酸和亚硝酸钠后，混合物加入到底液中。[0014]金纳米簇是由氯金酸与牛血清白蛋白，在碱性条件下，反应12小时制备，经过透3CN107037020A说明书2/2页