一种全血DNA快速提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107058295A(43)申请公布日2017.08.18(21)申请号201710355571.0(22)申请日2017.05.19(71)申请人武汉未来组生物科技有限公司地址430075湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋(72)发明人汪德鹏陶江明陈逢张笋郭启明王圆黄萌汤环宇(74)专利代理机构武汉河山金堂专利事务所(普通合伙)42212代理人胡清堂(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种全血DNA快速提取方法(57)摘要本发明提供了一种全血DNA快速提取方法，步骤包括：S1、将血液样本高速离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40-60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；S2、向上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；S3、向沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，水浴30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA。该方法对样本的处理量大，先通过高速离心去除大部分位于上清液的红细胞，再将沉淀的血细胞(白细胞)用自配的全细胞裂解液一步裂解血细胞，从血液中快速大量的得到适于三代测序的DNA。CN107058295ACN107058295A权利要求书1/1页1.一种全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤包括：S1、将血液样本在13000～16000rpm转速下离心后去掉上清液，保留沉淀，加入裂解液后混匀至澄清状态，置于50～60℃水浴40-60min，冷却后采用有机溶剂抽提，离心后取上清液；所述裂解液组份包括：0.8～1.2M盐酸胍；pH8.0～8.5、30～100mMTris-Cl；pH8.0～8.5、30～100mMEDTA，体积百分比4～8％Tween-20，体积百分比0.3～1％TritonX-100，质量体积比0.3～1％SDS和0.3～1mg/ml蛋白酶K；S2、向步骤S1所得上清液中加入异丙醇和NaAc，混匀后收集沉淀，清洗沉淀后晾干；S3、向步骤S2所得晾干的沉淀中加入TEN缓冲液和核糖核酸酶，混匀后置于37℃温育30min，再加入含有蛋白酶K的TEN缓冲液，混匀，置于50～60℃下30min，冷却后离心，取上清液纯化得到纯净DNA。2.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S3所述TEN缓冲液组份为：pH8.0～8.5、50～100mMTris；pH8.0～8.5、50～100mMEDTA；1～1.5MNaCl。3.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1中，裂解液添加量为血液样本体积的1.5～2.5倍，且裂解液预热至20～40℃后再添加至沉淀中。4.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1所述有机溶剂为氯仿异戊醇混合液，所述氯仿异戊醇体积比为23～25:1。5.如权利要求4所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1中，抽提次数为1次。6.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1中，所述水浴过程中每5～10min混匀1次。7.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S1中，所述离心时长8～15min，温度4～16℃。8.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S2所述异丙醇用量为上清液体积的0.7～1倍，所述NaAc用量为上清液体积的0.1倍。9.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S3所述含有蛋白酶K的TEN缓冲液稀释5～10倍使用，蛋白酶K的浓度为0.5～1mg/mL。10.如权利要求1所述的全血DNA快速提取方法，其特征在于：步骤S3所述上清液纯化采用磁珠纯化，磁珠用比为0.5～1倍待纯化样品体积。2CN107058295A说明书1/6页一种全血DNA快速提取方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，涉及一种提取动物基因组DNA的方法，具体涉及一种用于三代测序的大量全血DNA快速提取方法。背景技术[0002]核酸测序技术如今已成为生物学研究领域的强大助手，第二代高通量测序技术的应用已取得诸多可喜可贺的成果，但技术原理决定了二代测序存在诸多弊端，如测序读长短、反复PCR扩增造成的扩增偏好性、难以覆盖高GC含量和重复序列区域等。而第三代高通量测序技术的出现，可以完美解决这些问题，其测序读长10～60kb甚至更长，无PCR扩增过程无GC偏向性等，在基因组的组装上对比二代有无与伦比的优势，也因为如此，三代测序对起始DNA样品的要