一种全血基因组DNA提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112080494A(43)申请公布日2020.12.15(21)申请号202011010016.2(22)申请日2020.09.23(71)申请人常州市武进人民医院地址213000江苏省常州市天宁区永宁北路2号(72)发明人陈文亚毛伦林季莉莉马爱金刘志清王利惠张金王佳佳黄婷婷(74)专利代理机构六安市新图匠心专利代理事务所(普通合伙)34139代理人朱小杰(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种全血基因组DNA提取方法(57)摘要本发明公开了一种全血基因组DNA提取方法，包括以下步骤：首先向全血样本中加入血液抗凝剂；取80‑200ul新鲜全血样本置于2ml离心管中，并将其置于离心机内进行离心，而后移除上清液，保留沉淀；向步骤S2中制得的沉淀中添加100‑300ul的裂解液和100‑300mg/ml的纳米磁珠20‑50ul，振荡混匀1min，而后室温静置；将步骤S3的离心管置于磁力架上，待纳米磁珠完全吸附后，使用无菌移液枪头移除上清液，并向沉淀中加入600‑1200ul洗涤液，而后通过离心机进行振荡混匀1min；将步骤S4离心管置于磁力架上。本发明在DNA提取的过程中，其提取纯化步骤简单便捷，且提取的DNA完整度较好，含量高，方便实验人员后续的使用，操作过程耗时短，便于操作和使用，且在操作的过程中使用的有毒试剂较少，较为安全。CN112080494ACN112080494A权利要求书1/1页1.一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、首先向全血样本中加入血液抗凝剂；S2、取80-200ul新鲜全血样本置于2ml离心管中，并将其置于离心机内进行离心，而后移除上清液，保留沉淀；S3、向步骤S2中制得的沉淀中添加100-300ul的裂解液和100-300mg/ml的纳米磁珠20-50ul，振荡混匀1min，而后室温静置；S4、将步骤S3的离心管置于磁力架上，待纳米磁珠完全吸附后，使用无菌移液枪头移除上清液，并向沉淀中加入600-1200ul洗涤液，而后通过离心机进行振荡混匀1min；S5、将步骤S4离心管置于磁力架上，纳米磁珠完全吸至管壁上时，通过无菌移液枪将上清液吸弃，并将处理后的离心管置于烘干机内进行烘干，直至管内无液体残留；S6、向S5离心管内加入100-300ul洗脱液；S7、向步骤S6离心管中置于50-65℃水浴30-50min水浴处理，而后冷却后添加有机溶剂进行抽提，并对离心管进行离心处理，离心处理后置于磁力架上待纳米磁珠完全吸附后，提取上清液，则获取DNA基因组。2.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述血液抗凝剂为血液抗凝易用柠檬酸抗凝液。3.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S2中的离心速率为8000-12000r/min，且离心过程中温度大于20℃。4.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述裂解液的组分为：pH7.5～8.2、30～100mMEDTA、百分比0.5～1.5％TritonX-100、质量体积比0.5～1.2％SDS、蛋白酶K、RNaseA、0.8～1.2M盐酸胍、3-8M碘化锂、100-200mM柠檬酸三钠、2～8％Tween20。5.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述纳米磁珠为硅胶质磁珠。6.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述离心管在磁力架上放置的时间T≥30s。7.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述洗涤液的组分为：1-5M异硫氰酸胍、pH7.0-9.0浓度1-10mMTris-HCL、10-80mMNaCl和30％-65％的无水乙醇。8.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述洗脱液为pH6.0-9.0浓度8-25mM的Tris-HCL和pH8.0-9.0浓度1-2mM的EDTA二钠。9.根据权利要求1所述的一种全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S7中的有机溶剂为氯仿异戊醇混合液，所述氯仿异戊醇体积比为20～30:1。2CN112080494A说明书1/4页一种全血基因组DNA提取方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种全血基因组DNA提取方法。背景技术[0002]核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。核酸提取是指利用物理、化学方法将核算从载体中分离出来的过程。目前