一种快速筛查鱼肉中多种兽药残留的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107167539A(43)申请公布日2017.09.15(21)申请号201710502192.X(22)申请日2017.06.27(71)申请人中山出入境检验检疫局检验检疫技术中心地址528400广东省中山市中山六路二号(72)发明人张宪臣华洪波李蓉李浩洋卢俊文张朋杰容裕棠(74)专利代理机构中山市科创专利代理有限公司44211代理人毛海娟(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/88(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图4页(54)发明名称一种快速筛查鱼肉中多种兽药残留的检测方法(57)摘要本发明公开了一种快速筛查鱼肉中多种兽药残留的检测方法，首先配制31种标准溶液，进行测定，并绘制标准工作曲线，采用QuEChERS的方法对样品进行前处理，有效地减少了基质对目标化合物(包括β－内酰胺类、非甾体类抗炎药等31种兽药残留)的干扰影响，再将处理后的样品用超高效液相色谱-高分辨质谱仪测定。本发明可以测定鱼肉中31种兽药残留，灵敏度高，检测限为0.1μg/kg～2.5μg/kg，检测方法简单、快速、准确、灵敏度高、精密度好，适用于大批量检测鱼肉样品，能够准确的对目标化合物进行定量、定性分析，避免了假阳性的现象出现。CN107167539ACN107167539A权利要求书1/1页1.一种快速筛查鱼肉中多种兽药残留的检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)标准溶液配制：准确称取苯唑青霉素钠、氨苄青霉素、氯唑西林钠、双钠青霉素钠盐水合物、头孢噻呋、萘夫西林钠－水合物、苯唑西林钠、苯氧甲基青霉素钾盐、哌拉西林标准品5.0mg，于各自的5mL容量瓶中，用乙腈水溶液(乙腈:水＝30:70，v/v)溶解并定容至刻度，制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，准确称取2-氨基－5-苯并咪唑、妥曲珠利、克拉珠利、酮洛芬、美洛昔康、对乙酰氨基酚、吡罗昔康、水杨酸、舒林酸、托灭酸、托美丁钠、4-氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林、4-甲氨基安替比林、保泰松、17α-羟孕孕酮、醋酸美伦孕酮、乙酸甲地孕酮、甲羟孕酮、群地龙、勃地酮和诺龙标准品各5.0mg，于各自的5mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，置于4℃冰箱中保存；(2)样品的QuEChERS提取和净化：称取粉碎均匀的鱼肉样品2.0g于50mL高速离心管中，加入1.5g氯化钠、5gNa2SO4和10mL乙腈，涡旋震荡2min后超声提取10min，再以15000r/min，温度5℃离心10min，将上层液转移至已提前放入0.05gC18、0.08g正丙基乙二胺(PSA)、4gNa2SO4和0.025g氨丙基硅胶的25mL离心管中，涡旋震荡5min，再以15000r/min，温度5℃离心3min，上清液转入30mL玻璃管中，得样品提取液；(3)浓缩：将样品提取液在40℃下用平行定量浓缩仪减压浓缩至干，用1.0ml乙腈水溶液(乙腈:水＝10:90，v/v)涡旋溶解残留物，提取液过0.2μm滤膜后，用超高效液相色谱-高分辨质谱仪测定；所述超高效液相色谱-高分辨质谱仪的参数为：色谱：ACQUITYUPLCBEHC18100mm×2.1mm，1.7μm；柱温：40℃；进样量：10μL；流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为0.1％甲酸乙腈溶液；梯度洗脱程序0～1.0min，保持95％A；1.0～7.0min，流动相A的比例由95％线性变化至5％；7.0～10.0min，保持5％A；10.1～13min，保持95％A；质谱：加热电喷雾离子源温度为350℃，离子传输温度为320℃，鞘气为40unit，辅助气为40unit，毛细管电压为3.2KV，离子传输管温度为325℃；Fullscan/ddms2扫描模式：采集范围为100～1500Da，正负切换采集；一级质谱分辨率为70000FWHM，二级质谱分辨率为17500FWHM；碰撞池能量NCE为20，40，60eV。2.根据权利要求1所述的一种快速筛查鱼肉中多种兽药残留的检测方法，其特征在于所述样品提取液用平行定量浓缩仪减压浓缩，平行定量浓缩仪的冷凝温度为0℃，真空度采用300mbar10min，100mbar10min，30mbar梯度下降的方式浓缩至干。3.根据权利要求1所述的一种快速筛查鱼肉中多种兽药残留的检测方法，其特征在于质谱仪进行一级全扫描时发现目标列表里的母离子时，且信号强度超过预设值后，就会触发数据依赖子离子扫描模式，进而获得对应母离子精确质量数的二级离子全扫描质谱信息，计算离子碎片的精确质量数，通过与质谱图谱拟合确定每种待测物质有1个监测离子对用于定性确证。2CN107167539A说明书1/11