耐盐薄荷的离体培养与植株再生的研究.docx

耐盐薄荷的离体培养与植株再生的研究摘要：为研究耐盐薄荷的快速繁育技术以耐盐的椒样薄荷茎段为外植体采用正交试验L4（23）筛选其愈伤诱导培养基。研究结果表明NAA是影响耐盐薄荷诱导愈伤能力的重要因素其最适浓度为0.2mg/L愈伤诱导率达92%以上。在此基础上通过扩大培养基中6-BA浓度进行不定芽增殖培养基筛选最终确定增殖培养基为2/3MS+5.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+4g/L琼脂pH值6.0（灭菌前）；此培养基下培养增殖系数达19.23。在诱导生根培养基的筛选中综合分析植株生长量（株高）、生根数量（根数）及根生长量（根长）确定生根培养基为1/2MS+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+4g/L琼脂pH值6.0。关键词：椒样薄荷；离体培养；诱导；增殖；植株再生土壤盐渍化问题是困扰农业生产的一大难题。当前世界上灌溉地面积约为230Mhm2其中遭盐害影响的土壤约占45Mhm2。旱地农业面积约为1500Mhm2其中遭盐害影响的土壤约占32Mhm2。耕地土壤盐渍化的退化面积正在以3hm2/min的速度增长。据FAO估计世界范围内每年因盐害丧失生产力的土地面积达0.25M～0.50Mhm2[1]。就我国而言在1亿hm2耕地中有667万hm2盐碱化土壤另有0.346亿hm2盐碱荒地[2]。随着人口的剧增及工业的高速发展我国可耕地面积急剧下降同时不合理灌溉又造成了大量良田的次生盐渍化。因此开发和利用大面积盐渍化土地利用耐盐植物资源发展盐渍地生态农业十分必要。耐盐薄荷是山东省科学院中日友好生物技术研究中心经耐盐性试验筛选出的系椒样薄荷（MenthapiperitaL.）的一种耐受NaCl胁迫浓度为0.8%。耐盐薄荷除具有薄荷的一般功效外还因具有耐盐碱性而作为药赏两用植物逐渐被关注。耐盐薄荷是水薄荷与绿薄荷杂交而成的一个不育性中间类型以分株繁殖为主。但长期采用无性繁殖易发生病害引起品种退化和产量、质量下降[34]。研究证明成熟完善的植物组织培养技术是解决品种退化和更新的有效手段之一[56]。因此本研究以耐盐的椒样薄荷茎段为外植体对其离体培养及植株再生条件进行了研究以期为耐盐薄荷的品种改良和快速繁殖提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料供试薄荷外植体取自山东省科学院生物中心中澳盐生植物实验基地。1.2试验方法①外植体灭菌从苗圃中取生长旺盛的薄荷植株去叶留茎和芽点流水冲洗20min后用滤纸吸干水分在超净工作台上用75%酒精消毒1min、0.1%HgCl2溶液消毒8～10min后用无菌水冲洗4～5遍吸干水后用手术剪对外植体进行修剪截取长度2～3cm的茎段并将其接种在1/2MS培养基中置于光照培养箱中培养。3d后挑取无污染茎段转接至愈伤诱导培养基中。②愈伤诱导培养基的筛选采用正交试验L4（23）筛选。选取上述培养的无菌苗置于培养基中进行愈伤的诱导。培养30d后调查愈伤诱导率。愈伤诱导率（%）=茎段愈伤形成个数/接种的茎段个数×100%。③不定芽增殖培养基的筛选取3cm长的健壮无菌苗接种到不同浓度6-BA和NAA配比的2/3MS培养基中并添加30g/L蔗糖和4g/L琼脂进行不定芽诱导。培养50d（期间转接1次）后调查增殖系数。不定芽增殖系数（%）=不定芽总数/接种的茎段数×100%。④生根培养基的筛选取3cm长的健壮无根苗接种到不同浓度6-BA和NAA配比的1/2MS培养基中并添加30g/L蔗糖和4g/L琼脂进行生根诱导。培养2周后统计植株生长量（株高）、生根数量（根数）及根生长量（根长）3周后进行比较分析。⑤培养条件以上每个处理各接种5瓶每瓶5株重复5次。培养基pH值均为6.0（灭菌前）光照培养箱温度（24±2）℃生根光照时间12h/d（日光灯光照强度2000lx）其他光照时间14h/d。对所得数据用SPSS10.0软件包计算方差对处理间进行0.05水平上的差异显著性分析。2结果与分析2.1愈伤诱导培养基的筛选由表2可知正交优选配方为A（12）B1C2即1/2MS（2/3MS）+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+4g/L琼脂。由R值可知NAA（C）是重要因素6-BA（B）是较重要因素MS（A）是影响较小因素即影响因素C>B>A。因此通过该试验确定NAA是耐盐薄荷诱导愈伤能力的重要因素其最适浓度为0.2mg/