绿豆多肽制备工艺的研究进展.docx

绿豆多肽制备工艺的研究进展绿豆（Mungbean）为豆科豇豆属绿豆（VignaradiatusLinn）的成熟种子。绿豆作为我国主要的粮食作物之一在我国已有两千多年的栽培史分布非常广泛产量极为丰富。绿豆用途广泛营养丰富被誉为粮食中的绿色珍珠既是食用佳品又是重要的药材和化妆品原料。绿豆中蛋白质含量高于常见的谷物蛋白质但是低于大豆蛋白质同时因产地和品种的差异而不同。绿豆中氨基酸种类齐全富含谷物普遍缺乏的赖氨酸其含量与鸡蛋蛋白质赖氨酸含量相当。绿豆蛋白经过酶解后可以得到具有不同分子量和不同功效的肽比如抗氧化肽和抗菌肽。相比绿豆蛋白质来讲。多肽的氨基酸组成与结构几乎没有变化但相对分子质量较小。具有较好的水溶性、较低的黏度、稳定性很强等优点。多肽具有多种生理功效比如抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、降血脂、降胆固醇等作用。李杨等利用响应面法优化酶解工艺采用碱性蛋白酶进行酶解其最佳的酶解工艺为pH9.37、酶解温度55℃、底物质量分数7.0%、加酶量5000.02U/g的条件下酶解4.76h多肽含量可达到913.7mg/g。卢珍华等通过单因素实验研究木瓜蛋白酶对绿豆分离得到的粗蛋白的水解作用得到制备绿豆多肽的最佳水解条件为：底物浓度7%酶浓度8%反应温度65℃在pH6.5时反应3h。并利用葡聚糖凝胶（SephadexG-25）柱层析测定绿豆多肽分子量。试验结果表明当水解度为30%时绿豆多肽分子量绝大多数在1000Da以下。傅亮等用Alcalase碱性蛋白酶将得到的蛋白含量为778.5mg/g的粗蛋白进行酶解他们以水解度DH为指标得到酶解最佳条件为：底物浓度为2%（[E]/[S]）3.5%温度为55℃pH9.0酶解120min得到的绿豆多肽提取液在4种抗氧化体系中均表现出较强的抗氧化性具有良好的还原能力其清除羟自由基和超氧阴离子的能力很好其IC50分别是13.9612.67mg/mL抗脂质过氧化能力的IC50为15.77mg/mL。潘妍等用绿豆种子为原料以蛋白质含量和还原糖含量为指标从5种酶中综合比较出碱性蛋白酶更优于其他四种蛋白。在单因素试验的基础上进行正交试验得到最佳酶解条件为：料液比1：25加酶量为7%提取时间为1h。并对提取液进行美白和抗氧化功效的初步研究。结果显示当样品浓度为10%时酪氨酸酶抑制率为49.98%DPPH清除率为33.53%·OH清除率为39.08%。利用高效液相色谱精确测定样品蛋白分子量分布其分子量主要分布在408.41～1830.64之间。ACE抑制肽的制备血管紧张素转化酶（angitensinconvertingenzymeACE）在人体血压调节过程中起重要的生理作用一是它使无活性的血管紧张素Ⅰ转化为升压物质一血管紧张素Ⅱ；二是它能使降压物质分解成失活片段从而导致血压升高。因此通过抑制ACE的活性可以起到降血压的作用。食物蛋白中存在着大量的并具有不同分子特性的AC抑制肽分子片段。绿豆作为我们日常食用的粮食作物从绿豆蛋白中提取出的ACE抑制肽安全性高无副作用且能提高绿豆的附加值。龚琴等以购买的绿豆蛋白粉为原料制备绿豆ACE抑制肽通过不同的酶进行酶解并测定酶解产物的水解度和对ACE的抑制率。其中用碱性蛋白酶对绿豆蛋白进行酶解得到的产物其水解度和ACE抑制率均最大。确定试验所用的酶源后通过单因素试验得到的最适条件的基础上。随后选取对ACE抑制率有显著影响的四个因素进行四因素三水平的响应面分析试验经过优化得到最优条件为：底物浓度1.75%酶解温度55℃酶解pH8.25加酶量6200u/g。在此条件下绿豆ACE抑制肽的抑制率为84.83%。抗氧化肽的制备抗氧化肽就是一类存在于生物体内能够清除体内自由基、抑制生物大分子物质过氧化具有极强的抗氧化活性的生物活性肽。随着生命科学的不断发展以及对人类疾病、衰老等机理研究的不断深入氧化应激损伤和抗氧化保护作用的研究受到人们的普遍关注。抗氧化剂特别是天然存在于自然界的抗氧剂成为热点研究内容。孙键采用传统碱提酸沉法制备绿豆蛋白。首先用多功能粉碎机将脱皮绿豆粉碎过100目筛备用。称取一定量的脱皮绿豆粉以1：15的料水比加入蒸馏水用NaOH溶液调节pH值为9.0（±0.02）在40℃水浴锅中不断搅拌提取20min。碱提取完成后在4000r/min条件下离心20mln取上清液。用HCl溶液调节上清液的pH值为4.5（±0.02）静置30min使绿豆蛋白质在等电点处凝聚沉淀。酸沉过程中必须严格控制加酸及搅拌的速度控制不当即便是pH达到等电点时蛋白质仍然呈现絮状漂浮状不能完全沉淀。制备的绿豆蛋白粉中蛋白质的含量在75%以上。接着用中性蛋白酶