简析丹酚酸提取工艺.docx

简析丹酚酸提取工艺丹参水溶性有效成分多具有酚酸性结构丹参素(化学名为β34二羟苯乳酸β34dihydroxybenyllacticacid)是各种丹酚酸的基本化学结构:丹酚酸A是一分子丹参素与两分子咖啡酸缩合而成;丹酚酸B为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成;丹酚酸C则为二分子丹参素缩合而成;其他丹酚酸亦有类似结构。丹参水溶性成分中的迷迭香酸(rosmarinicacidARos)也是由一分子丹参素和一分子咖啡酸缩合而成。此外还有四甲基丹酚酸(tetramethylsalvianolicacidASalM)等等[1]。目前工业上提取丹参有效成分主要以热回流法为主而酚酸类性质不稳定、易氧化水解因而提取工艺的研究应多指标综合考虑。选择不稳定成分作为提取工艺筛选的指标性成分有利于筛选出合理的工艺条件防止成分在提取工艺中损失过大[2-3]。本研究以提取物得率和丹酚酸B含量为指标进行丹酚酸提取工艺研究以确定最佳的提取工艺探索适合工业化提取的工艺条件。1仪器与试剂1.1仪器FA1004N型电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)JZ8002天平(上海精密科学仪器有限公司)RE5298A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)LXJII型离心沉淀机(上海医用分析仪器厂)YL015型实验型喷雾干燥机(上海雅程仪器设备有限公司)QT330型柱温箱(QM旗美)LC10ATVP型泵(日本岛津)SPD10AVP型紫外检测器(日本岛津)高效液相色谱柱(Diamonsil钻石)电子天平(SHIMADZUAY120)KQ100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)pHS25型pH计(上海智光仪器仪表有限公司)。1.2试药与试剂丹参药材系唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根茎(购自广州市天河宝润堂中药饮片厂)经广州中医药大学高英主任药师检验符合《中国药典》2005版一部丹参项下规定。乙醇(分析纯天津市富宇精细化工有限公司)甲醇、乙腈(色谱纯迪马科技有限公司)甲酸(分析纯广州化学试剂厂)D101大孔吸附树脂(天津市光复精细化工研究所)盐酸(分析纯广州市白云区良田光明化工厂)FeCl3(分析纯天津市大茂化学试剂厂)丹酚酸B对照品(批号:200504中国药品生物制品检定所)。2方法2.1丹酚酸提取工艺2.1.1实验设计采用均匀设计法选择影响醇提的3个主要因素:乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取温度(C)为考察指标乙醇浓度选择9个水平提取时间及提取温度各选择3水平、各水平循环3次采用U9(96)表安排试验见表1。表1因素水平表2.1.2样品溶液的制备取丹参药材100g加入3000mL的圆底烧瓶中按表1实验列号各条件操作于恒温水浴锅中加热浸提趁热抽滤滤渣再按原条件进行第2次乙醇浸提趁热抽滤合并2次滤液。将提取液用旋转蒸发仪进行减压浓缩至乙醇除尽将浓缩液用配制好的质量分数10%的盐酸溶液调至pH=3用离心机(2000r/min5min)离心浓缩液用布氏漏斗抽滤作为样品溶液备用。2.2大孔吸附树脂分离纯化2.2.1树脂的预处理D101树脂用体积分数95%的乙醇浸泡24h除去上层漂浮物湿法装柱用乙醇流动清洗应不时检查流出的乙醇液至乙醇液与水混合(1∶5)不呈白色浑浊为止然后用水冲洗至无醇味止。2.2.2丹参提取液分离纯化离心后的样品溶液通过D101大孔树脂(药材与树脂用量比为1∶4;流速为2.0~3.0BV/h)用水进行冲洗除去水溶性杂质。采用FeCl3检测法判断洗脱液中有无丹酚酸B成分被洗脱用水6倍量冲洗继用体积分数30%的乙醇7倍量洗脱(流速为0.5~1.0BV/h)。收集体积分数为30%的乙醇洗脱液用旋转蒸发仪(60℃)减压浓缩浓缩至液体相对密度为1.15。浓缩液喷雾干燥(进风温度220℃出风温度80℃)最终得淡黄色固体粉末。置干燥器内备用。2.3丹酚酸B含量测定2.3.1供试品溶液的制备精密称取丹参提取物粉末10mg加入100mL量瓶中加水溶解定容摇匀过0.45μm微孔滤膜即得。2.3.2色谱条件色谱柱:C18(250mm×4.6mm5μm);流动相:甲醇水乙腈甲酸(体积比30∶59∶10∶1);流速:1mL·min-1;检测波长:286nm;进样量:10μL;柱温:35℃;2.3.3含量测定方法[4]精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪中按“2.3.2”项下条件操作测定丹