固定化的纤溶酶原酶组合物、制备方法、用途和包含此类组合物的装置.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107787366A(43)申请公布日2018.03.09(21)申请号201680034582.2(74)专利代理机构永新专利商标代理有限公司(22)申请日2016.04.1472002代理人王健林晓红(30)优先权数据15533472015.04.15FR(51)Int.Cl.C12N9/72(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N11/08(2006.01)2017.12.13(86)PCT国际申请的申请数据PCT/FR2016/0508692016.04.14(87)PCT国际申请的公布数据WO2016/166484FR2016.10.20(71)申请人阿卡多福塔公司地址法国图卢兹(72)发明人G·勒布尔C·索F·瓦尔尼权利要求书2页说明书16页附图1页(54)发明名称固定化的纤溶酶原酶组合物、制备方法、用途和包含此类组合物的装置(57)摘要本发明涉及包含下列的酶组合物：-至少一种酶，称为纤溶酶原酶，其将包含纤溶酶原的血液血浆介质中的纤溶酶原转变为纤溶酶；-在水性溶液中不可溶的固体载体，该固体载体具有适合于能保留在具有小于或等于0.22μm的截留阈值的滤器上的尺寸；其特征在于，所述纤溶酶原酶结合所述固体载体并且在与血液血浆介质相接触时保持与该载体结合，并且组合物处于干燥状态。本发明还涉及制备此类酶组合物的方法、其用途和用于制备无菌的和没有酶组合物的富含纤溶酶的离体血浆介质的装置(20)。CN107787366ACN107787366A权利要求书1/2页1.酶组合物，其包含：-至少一种酶，称为纤溶酶原酶，其将包含纤溶酶原的血液血浆介质中的纤溶酶原转变为纤溶酶；-在水性溶液中不可溶的固体载体，该固体载体具有适合于能保留在具有小于或等于0.22μm截留阈值的过滤器上的尺寸；其特征在于，所述纤溶酶原酶与固体载体相结合并且在与血液血浆介质接触时保持与该载体结合，并且组合物处于干燥状态。2.权利要求1的组合物，其特征在于所述固体载体处于分散状态并且由具有沿着三个彼此正交方向延伸的三个维度的颗粒形成，三个维度中的至少两个大于0.22μm。3.权利要求1或2之一的组合物，其特征在于所述固体载体由选自聚甲基丙烯酸类聚合物的材料形成。4.权利要求1至3之一的组合物，其特征在于至少一种纤溶酶原酶为酶分类EC3.4.21类的丝氨酸内肽酶。5.权利要求1至4之一的组合物，其特征在于至少一种纤溶酶原酶通过至少一个共价键与固体载体相结合。6.权利要求1至5之一的组合物，其特征在于其是无菌的。7.权利要求1至6之一的组合物，其特征在于其处于脱水粉末状态。8.权利要求1至7之一的组合物，其特征在于至少一种纤溶酶原酶通过以下原子团与固体载体相结合，所述原子团包含通过共价键相互线性连接的原子主链，所述主链具有至少等于4的原子数。9.权利要求1至8之一的组合物，其特征在于使每个纤溶酶原酶与固体载体相结合以便在放置酶组合物接触的血液血浆介质中引入少于400μg的游离纤溶酶原酶量，所述接触按照下列方法进行：-在37℃级别温度混合0.01g至0.5g质量的处于脱水状态的酶组合物与0.5mL至1.0mL体积的血液血浆介质，然后-保持接触大于5分钟的时间，然后-通过在具有小于或等于0.22μm截留阈值的过滤器上过滤分开酶组合物和血液血浆介质，和-测量释放在血液血浆介质中的纤溶酶原酶量。10.权利要求1至9之一的组合物，其特征在于在下列条件下，其具有将与其接触的血液血浆介质的纤溶酶原转变为纤溶酶的活性，即纤溶酶原酶活性：-使0.01g至0.5g质量的处于脱水状态的酶组合物在37℃级别温度与0.5mL至1.0mL体积的血液血浆介质接触大于5分钟的时间，和-在通过过滤酶组合物和富含纤溶酶的离体血浆介质而分离后，形成富含纤溶酶的离体血浆介质，其具有起始酶活性，称为纤溶酶活性，通过对硝基苯胺释放试验测量，其大于每分钟和每毫升(mL)富含纤溶酶的离体血浆介质释放0.1微摩尔对硝基苯胺，所述释放试验包括：○在保持在37℃温度的富含纤溶酶的离体血浆介质中混合在富含纤溶酶的血液血浆介质中的起始浓度为1mM级别(即10-3摩尔/升)的下式(I)的显色底物S-2251：2CN107787366A权利要求书2/2页○评价混合后每分钟和每毫升(mL)富含纤溶酶的离体血浆介质的对硝基苯胺释放的起始速率(微摩尔对硝基苯胺)。11.制备权利要求1至10之一的酶组合物的方法，其中：-选择至少一种酶，即纤溶酶原酶，其将包含纤溶酶原的血液血浆介质中的纤溶酶原转变为纤溶酶；-选择在水性溶液中不可溶的固体载体；其○适合于能在与血液血浆介质接触时与每个纤溶酶原酶形成稳定的键，和；○具有适合于能保留在具有小于或等于