一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β‑谷甾醇的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107782828A(43)申请公布日2018.03.09(21)申请号201711316125.5(22)申请日2017.12.12(71)申请人江南大学地址214122江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学(72)发明人常明冯文欢王兴国金青哲刘睿杰吴正章张鹏(74)专利代理机构南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙)32272代理人王晓东(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法(57)摘要本发明公开了一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，包括，标准溶液的配制，采用极性溶剂配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合标准储备液，经处理后，再用极性溶剂分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液。我方发明，不仅使3种甾醇单体达到基线分离，大大缩短了保留时间，最终确定了最优的色谱条件为1.0mL/min，检测波长208nm，柱温35℃，且该方法精密度和加样回收率均较高，能够满足准确定量3种甾醇单体含量的检测要求。CN107782828ACN107782828A权利要求书1/1页1.一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：包括，标准溶液的配制：采用极性溶剂配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合标准储备液，经处理后，再用极性溶剂分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液；色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，检测波长为200～220nm，柱温为25～45℃，流速为0.5～1.5mL/min。2.根据权利要求1所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述采用极性溶剂配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇混合标准储备液，其中，所述极性溶剂包括甲醇。3.根据权利要求1或2所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述经处理后，其是用氮吹仪将所述混合标准储备液中的甲醇吹干。4.根据权利要求1所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述再用极性溶剂分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液，其中，所述极性溶剂包括乙腈。5.根据权利要求1、2或4中任一项所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述分别配制含菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合标准系列溶液，其是，配制含菜油甾醇2.5、5、10、20、40、50μg/mL的混合标准系列溶液，配制含豆甾醇5、10、20、40、80、100μg/mL的混合标准系列溶液，配制含β-谷甾醇5、10、20、40、80、100μg/mL的混合标准系列溶液。6.根据权利要求5所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述色谱条件，其中，流动相包括100％乙腈、100％甲醇、乙腈:水＝85:5～99:1(v/v)或甲醇:水＝85:5～99:1(v/v)。7.根据权利要求1、2、4或6中任一项所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述色谱条件，其中，流动相包括100％乙腈或乙腈:水＝85:5～99:1(v/v)。8.根据权利要求7所述通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法，其特征在于：所述色谱条件，其中，进样量为10～60μL。2CN107782828A说明书1/6页一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法技术领域[0001]本发明属于植物甾醇的分离技术领域，具体涉及一种通过高效液相色谱法分离测定菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的方法。背景技术[0002]植物甾醇是一种以环戊烷全氢菲为基本骨架的天然活性化合物，C-3位上连有羟基，C-17位上连有8～10个碳原子构成侧链的甾族化合物，属于脂质中的不皂化物，其中菜油甾醇(Campesterol)、豆甾醇(Stigmasterol)和β-谷甾醇(Sitosterol)是植物甾醇中含量最高的甾醇单体，其结构同时见图1。植物甾醇具有降低胆固醇和心血管疾病风险、抗癌、抗炎和抗氧化等生理功能，在医药、食品、化妆品等领域越来越受到重视，截止2015年全球甾醇的需求量高达1.8万吨左右。目前，植物甾醇主要从植物油脱臭馏出物和妥尔油中分离纯化获得。因此，建立一种灵敏准确、快捷简便的检测方法，以此测定植物甾醇的含量对分析此类活性物质具有重要意义。[0003]由于菜油甾醇和豆甾醇仅在C-22