一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107957456A(43)申请公布日2018.04.24(21)申请号201711227809.8(22)申请日2017.11.29(71)申请人王安波地址556000贵州省贵阳市小河区长江路416号A17栋1单位20楼3号(72)发明人王安波孙思杨梅汪俭(74)专利代理机构北京国坤专利代理事务所(普通合伙)11491代理人赵红霞(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/46(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图6页(54)发明名称一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法(57)摘要本发明属于检测技术领域，公开了一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法，选用磷酸-乙腈作为提取溶液；水饱和正己烷的除脂方法；选择WatersOasisHLB柱为固相萃取柱；选择1/4提取液过柱；选择89％(0.05mol/L磷酸/三乙胺):11％(乙腈)的流动相比例时；保留时间：恩诺沙星：8.41±0.5min，环丙沙星：5.41±0.5min，达氟沙星：7.33±0.5min，沙拉沙星：12.53±0.5min。本发明极大地节省了前处理时间和耗材成本，灵敏度与回收率均符合我国现行兽药残留检测标准，适用于大规模的样品分析。CN107957456ACN107957456A权利要求书1/1页1.一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法，其特征在于，所述检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法选用磷酸-乙腈作为提取溶液；水饱和正己烷的除脂方法；选择WatersOasisHLB柱为固相萃取柱；选择1/4提取液过柱；选择89％:11％的流动相比例时；保留时间：恩诺沙星：8.41±0.5min，环丙沙星：5.41±0.5min，达氟沙星：7.33±0.5min，沙拉沙星：12.53±0.5min。2.如权利要求1所述的检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法，其特征在于，所述检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法包括以下步骤：步骤一，称取2±0.05g均匀鸡蛋试样，置于离心管中，精确加入磷酸-乙腈提取液20.0mL，搅匀、涡旋混合10min，9000r/min冷冻离心10min；上清液转入另一离心管；步骤二，上清液中加入10mL水饱和正己烷，涡旋混匀5min，9000r/min冷冻离心10min，去除上层正己烷及固体，再加入10mL水饱和正己烷，重复除脂一次；弃去上层正己烷，下层为备用液；步骤三，HLB柱依次用5mL乙腈，5mL乙腈-缓冲液和5mL磷酸盐提取液淋洗活化；备用液取5.0mL(过柱，3mL水淋洗，真空抽干；加入2mL乙腈-缓冲液洗脱，真空抽干，过0.22μm微孔滤膜后上机分析；步骤四，采用ACQUITYUPLCBEHC18选定色谱分析。3.如权利要求2所述的检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法，其特征在于，所述步骤四中色谱柱：流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺：乙腈＝89:11；流速：0.25mL/min；检测波长：λex为280nm，λem为450nm；进样量：2μL。4.如权利要求2所述的检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法，其特征在于，所述步骤四中各药物保留时间：恩诺沙星：8.41±0.5min，环丙沙星：5.41±0.5min，达氟沙星：7.33±0.5min，沙拉沙星：12.53±0.5min。5.一种利用权利要求1～4任意一项所述检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法检测的氟喹诺酮类药物。2CN107957456A说明书1/7页一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法技术领域[0001]本发明属于检测技术领域，尤其涉及一种检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的方法。背景技术[0002]氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQNs)是一类人工合成抗菌药，抗菌效果极强，其中，恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)、环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)、达氟沙星(Danofloxacin,DAO)和沙拉沙星(Sarafloxacin,SAR)在畜禽生产中被广泛应用。FQNs使用不当导致的药物残留及潜在的致癌性，严重威胁着人体健康，联合国粮农组织、欧盟和我国等均规定了动物源性食品中FQNs残留量，FQNs残留引起的问题也越来越受到关注。我国检测鸡蛋中FQNs残留最常采用的方法是农业部781号公告-6-2006-《鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留量的测定-高效液相色谱法》，结合荧光检测器使用。荧光检测器的抗干扰能力相对较弱，对样品前处理和色谱分离条件要求高，分析时间较长，能同时检测氟喹诺酮类药物种类较少；氟喹诺酮类药物性质不稳定，容易降解，此法提取量较低(反复两次提取液共4mL)，提取效果不佳，全液过