用于细胞冷冻保存的组合物和方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109843052A(43)申请公布日2019.06.04(21)申请号201780061611.9(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所(22)申请日2017.10.0411105代理人曹立莉(30)优先权数据62/404,1702016.10.04US(51)Int.Cl.62/405,4472016.10.07USA01N1/02(2006.01)A01N1/00(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N5/071(2006.01)2019.04.03C12N5/00(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/CN2017/1052532017.10.04(87)PCT国际申请的公布数据WO2018/064976EN2018.04.12(71)申请人全崴生技股份有限公司地址中国台湾新竹市(72)发明人施冰如江昆琦林政毅黃廷宇权利要求书2页说明书27页附图1页(54)发明名称用于细胞冷冻保存的组合物和方法(57)摘要本发明提供了一种用于细胞冷冻保存的组合物，其包含渗透性冷冻保护剂、糖类和大分子。冷冻保存组合物对细胞和组织具有低毒性，并且在冷冻保存期间促进生物材料的存活和活性保留。CN109843052ACN109843052A权利要求书1/2页1.一种冷冻保存组合物，其包含：(1)约2％(w/v)至约40％(w/v)的渗透性冷冻保护剂；(2)约0.1M至约1M的糖类；和(3)约1％(w/v)至约10％(w/v)的大分子，其中单位％(w/v)和单位M是基于所述冷冻保存组合物的总体积。2.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其中所述渗透性冷冻保护剂包括甘油、聚乙二醇或其组合。3.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其中所述糖类包括蔗糖、山梨糖醇、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、甘露糖、麦芽糖或其组合。4.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其中所述糖类包括蔗糖、海藻糖或其组合。5.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其中所述大分子的分子量为约65kDa至约200kDa。6.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其中所述大分子包括白蛋白、明胶或其组合。7.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其基本上不含DMSO。8.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其还包含氨基酸、细胞因子、脂质、生长因子、抗生素、抗真菌剂、类固醇激素、蛋白质激素或其组合。9.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其还包含一个或多个细胞。10.根据权利要求9所述的冷冻保存组合物，其处于冷冻保存状态。11.根据权利要求9所述的冷冻保存组合物，其中所述细胞的浓度范围为约105个细胞/ml至约107个细胞/ml。12.根据权利要求1所述的冷冻保存组合物，其包含：(1)约2％(w/v)至约20％(w/v)的渗透性冷冻保护剂；(2)约0.1M至约0.5M的糖类；和(3)约1％(w/v)至约5％(w/v)的大分子。13.根据权利要求12所述的冷冻保存组合物，其还包含一个或多个细胞。14.根据权利要求13所述的冷冻保存组合物，其处于冷冻保存状态。15.根据权利要求12所述的冷冻保存组合物，其中所述细胞以约105个细胞/ml至约107个细胞/ml的浓度存在。16.一种冷冻保存一个或多个细胞的方法，该方法包括以下步骤：(a)将所述一个或多个细胞与冷冻保存组合物混合以形成混合物，和(b)冷冻所述混合物，其中所述冷冻保存组合物包含：(1)2至40％(w/v)的渗透性冷冻保护剂；(2)0.1至1M的糖类；和(3)1至10％(w/v)的大分子。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。18.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞是人、猪、犬、马或牛的细胞。19.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞包含肿瘤细胞。2CN109843052A权利要求书2/2页20.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞包含成纤维细胞。21.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞包括干细胞。22.根据权利要求16所述的方法，其中将所述混合物在约-70℃至约-200℃的温度冷冻。23.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞以约105个细胞/ml至约107个细胞/ml的浓度存在于所述混合物中。24.根据权利要求16所述的方法，其中所述冷冻保存组合物基本上不含DMSO。25.根据权利要求16所述的方法，其还包括步骤(c)：解冻所述冷冻的混合物。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述细胞具有至少70％的解冻后存活率。27.根据权利要求25所述的方法，其中所述细胞的解冻后存活率为至少80％。28.一种试剂盒，其包含权利要求1-15中任一项的冷冻保存组合物。3CN10984305