抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110031570A(43)申请公布日2019.07.19(21)申请号201910429146.0(22)申请日2019.05.22(71)申请人南京海昌中药集团有限公司地址210061江苏省南京市高新开发区软件园2号研发楼B座1-3层申请人江苏海昇药业有限公司(72)发明人金俊杰蔡宝昌李国维朱妍格李轩涛(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人杨海军(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书2页说明书6页附图2页(54)发明名称抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法(57)摘要本发明公开了抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，该方法包括：步骤1、抗感冒颗粒供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备；步骤3、分别精密吸取供试品与对照品溶液注入液相色谱图仪，记录色谱图；步骤4、将抗感冒颗粒的指纹图谱仪器导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次抗感冒颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成抗感冒颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。本发明所研究的抗感冒颗粒指纹图谱，能全面、客观地评价甘草汁炙女贞子的质量。本发明提供的检测方法具有稳定性好、准确度高、重复性好、精密度高等优点。CN110031570ACN110031570A权利要求书1/2页1.一种抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，它包括以下步骤：步骤1、抗感冒颗粒供试品溶液的制备：取适量抗感冒颗粒，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇，回流提取，放冷过滤，滤液蒸干定容，离心后取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得待测供试品溶液；步骤2、抗感冒颗粒对照品溶液的制备：分别取绿原酸、黄芩苷、升麻素苷、甘草素和木犀草苷对照品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加甲醇分别配成对照品储备液；然后分别精密吸取绿原酸、黄芩苷、升麻素苷、甘草素和木犀草苷的对照品溶液适量，加甲醇定容至20ml，制成绿原酸、黄芩苷、升麻素苷、甘草素和木犀草苷的混合对照品溶液；步骤3、分别精密吸取按步骤1方法得到的抗感冒颗粒供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的抗感冒颗粒供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次抗感冒颗粒的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成抗感冒颗粒的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。2.根据权利要求1所述的一种抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1、抗感冒颗粒供试品溶液的制备方法为：取适量抗感冒颗粒，粉碎，精密称定粉末0.5g，加入甲醇30ml，回流提取2h，放冷过滤，滤液蒸干定容至2ml容量瓶，放入离心管以6000r/min转速，离心5分钟，取上清液用0.45μm有机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得待测供试品溶液。3.根据权利要求1所述的一种抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤2、混合对照品溶液的制备方法为：分别取绿原酸、黄芩苷、升麻素苷、甘草素和木犀草苷对照品适量，精密称定，置于10ml容量瓶中，加甲醇配成浓度分别为1000μg/ml、1050μg/ml、1290μg/ml、208μg/ml、250μg/ml的绿原酸、黄芩苷、升麻素苷、甘草素和木犀草苷的对照品储备液；分别精密取绿原酸、黄芩苷、升麻素苷、甘草素和木犀草苷的对照品溶液适量，加甲醇定容至20ml，制成每1ml含绿原酸100μg、黄芩苷105μg、升麻素苷129μg、甘草素20.8μg、木犀草苷25.0μg的混合对照品溶液。4.根据权利要求1所述的一种抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3、高效液相色谱仪检测的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度0.1％甲酸水作为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱，流速为0.5～1.5ml·min-1，柱温25～40℃，检测波长200～360nm。5.根据权利要求4所述的一种抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3高效液相色谱仪检测的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度0.1％甲酸水作为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱，流速为1ml·min-1，柱温30℃，检测波长254nm。6.根据权利要求4或5所述的一种抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于，梯度洗脱优选如下：2CN110031570A权利要求书2/2页时间/min流动相A体积百分比流动相B体积百分比09553070306070301203070。7.根据权利