一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110684814A(43)申请公布日2020.01.14(21)申请号201910744737.7(22)申请日2019.08.13(71)申请人浙江海洋大学地址316100浙江省舟山市普陀区普陀海洋科技产业园普陀展茅晓辉工业区c2—10地块(72)发明人胡世伟李世杰姜维刘宇(74)专利代理机构杭州杭诚专利事务所有限公司33109代理人尉伟敏(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法(57)摘要本发明涉及海洋生物提取物应用领域，尤其涉及一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法。其包括：1）蛋白浆制备：对金枪鱼皮进行破碎、加酸液匀浆，高压处理后得到蛋白浆；2）多重酶解：向蛋白浆中加入酶，对其进行升温酶解和高温灭酶得到酶解液；3）多重过滤：对酶解液进行过滤除杂，再经过有机膜过滤和透析截留，取透析袋中的保留液得到肽溶液；4）螯合反应：向肽溶液中加入酸调节pH值至酸性，再加入亚铁盐发生螯合反应后离心得到分层溶液；5）分离产物：取分层溶液的上清液，加入乙醇并低温沉淀，离心分离固态产物，对固态产物进行干燥和杀菌后即得到产物金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物。本发明提高了肽铁螯合物的得率，并且简洁高效。CN110684814ACN110684814A权利要求书1/2页1.一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1）蛋白浆制备：对金枪鱼皮进行破碎，并加入酸液匀浆，随后高压处理后得到蛋白浆；2）多重酶解：向蛋白浆中加入酸性蛋白酶和胃蛋白酶，形成预酶解液，对预酶解液进行升温酶解，随后高温灭酶得到酶解液；3）多重过滤：对酶解液进行初步过滤，去除固态杂质，随后依次经过有机膜过滤去除大分子杂质并利用透析袋透析截留活性成分，取透析袋中的保留液，即得到肽溶液；4）螯合反应：向肽溶液中加入抗坏血酸调节pH值至酸性，再加入亚铁盐，加热使其充分发生螯合反应后离心得到分层溶液；5）分离产物：取分层溶液的上清液，加入乙醇并置于低温条件下沉淀，沉淀后离心分离固态产物，对固态产物依次进行冷冻干燥和杀菌后即得到产物金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物。2.根据权利要求1所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤1）所述酸液为磷酸盐缓冲液；所用磷酸盐缓冲液体积为破碎后的金枪鱼皮松装体积的3～5倍。3.根据权利要求1或2所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤1）所述高压处理过程中：压力为350～450MPa，处理时长为40～60min。4.根据权利要求1所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中所用酸性蛋白酶的活性单位与步骤1）所用金枪鱼皮的质量比为（35000～45000）U：1g；步骤2）中所用胃蛋白酶的活性单位与步骤1）所用金枪鱼皮的质量比为（30000～40000）U：1g；步骤2）中所述预酶解液的pH值为4.5～6.5。5.根据权利要求1或4所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中升温酶解的条件为：温度40～60℃，酶解时间为6～8h；步骤2）所述升温酶解过程中：每间隔40～60min进行一次超声波辅助酶解，单次超声波辅助酶解时长为15～20min；步骤2）所述高温灭酶的条件为：温度95～100℃，灭酶时长为10～15min。6.根据权利要求1所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤3）所述有机膜为2000Da有机膜；步骤3）所述透析袋为200Da透析袋。7.根据权利要求1所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤4）中利用抗坏血酸调节肽溶液pH值至3～6；步骤4）所用亚铁盐包括氯化亚铁、硫酸亚铁、硝酸亚铁；2CN110684814A权利要求书2/2页所用亚铁盐与步骤1）所用金枪鱼皮的质量比为1：（7～10）；步骤4）中螯合反应的加热温度为35～50℃，反应时长为60～90min；步骤4）中离心转速为3500～5000r/min，离心时长为5～15min。8.根据权利要求1所述的一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，其特征在于，步骤5）中上清液与乙醇体积比为1：（3～6）；步骤5）中所述低温条件下沉淀为在3～5℃条件下沉淀6～8h；步骤5）中离心分离的转速为3500～5000r/min，离心时长为5～15min。3CN110684814A说明书1/7页一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法技术领域[0001]本发明涉