一种测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110749689A(43)申请公布日2020.02.04(21)申请号201911078847.0G01N30/86(2006.01)(22)申请日2019.11.07G01N30/06(2006.01)G01N30/14(2006.01)(71)申请人贵州省兽药饲料监察所（贵州省兽药残留监测中心）地址550003贵州省贵阳市南明区贵惠路130号(72)发明人章厉劼孙真峥王庆红赵贵周艺林郭萍周泽晓钱莘莘孙播东廖欢罗永成焦仁刚王培峰陈锡龙(74)专利代理机构贵阳中新专利商标事务所52100代理人张行超(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法(57)摘要本发明公开了一种测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，包括：(1)预处理，称取待测饲料样品，加入水、饱和氯化钠、0.05％乙酸溶液、混合提取液涡旋混合后离心，吸取上层萃取液，加入无水乙醇，混匀；在氮气下吹干；用甲基叔丁基醚+乙腈溶液溶解残渣，过滤得供试样品溶液；(2)液相色谱仪分析，测定斑蝥黄着色剂的峰面积；(3)根据前述待测饲料样品的斑蝥黄峰面积，利用斑蝥黄线性回归方程计算待测饲料中斑蝥黄着色剂的质量浓度，再计算待测饲料中斑蝥黄着色剂的含量。本发明方法具有简单、快速、准确、灵敏的特点，适用于饲料中斑蝥着色剂含量的检测分析。CN110749689ACN110749689A权利要求书1/1页1.一种测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，其特征在于，包括：(1)预处理称取待测饲料样品，加入水、饱和氯化钠、0.05％乙酸溶液、混合提取液涡旋混合后离心，吸取上层萃取液；用混合提取液重复萃取，所述混合提取液为甲醇：乙酸乙酯：正己烷的混合溶液；合并萃取液，加入无水乙醇，混匀；在氮气下吹干；用甲基叔丁基醚：乙腈溶液溶解残渣，过滤得供试样品溶液；(2)液相色谱仪分析将所述供试样品溶液上液相色谱仪进行分析，测定斑蝥黄着色剂的峰面积；(3)计算饲料中斑蝥黄着色剂的含量利用多组已知质量浓度的斑蝥黄溶液测定斑蝥黄峰面积，以斑蝥黄质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标进行线性回归，建立斑蝥黄线性回归方程；根据前述待测饲料样品的斑蝥黄峰面积，利用斑蝥黄线性回归方程计算待测饲料中斑蝥黄着色剂的质量浓度，再计算待测饲料中斑蝥黄着色剂的含量。2.根据权利要求1所述的测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，其特征在于，所述斑蝥黄线性回归方程为：y＝40401.4x-1776.1式中：y为斑蝥黄峰面积，x为待测饲料中斑蝥黄着色剂的质量浓度。3.根据权利要求1所述的测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，其特征在于，饲料中斑蝥黄着色剂含量的计算公式为：式中，W为待测饲料中斑蝥黄着色剂的含量，x为待测饲料中斑蝥黄着色剂的质量浓度，V为溶解残余物的甲基叔丁基醚+乙腈溶液的体积，m为待测饲料的质量。4.根据权利要求1所述的测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，其特征在于，所述混合提取液中甲醇：乙酸乙酯：正己烷的体积比例为1：1：1。5.根据权利要求1所述的测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，其特征在于，所述甲基叔丁基醚+乙腈溶液中甲基叔丁基醚：乙腈的体积比例为1：9。6.根据权利要求1所述的测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，其特征在于，饲料中斑蝥黄含量的检测范围为0.20～25mg/kg。2CN110749689A说明书1/5页一种测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法技术领域[0001]本发明涉及一种测定饲料中斑蝥黄着色剂含量的方法，属于斑蝥黄着色剂含量检测技术领域。背景技术[0002]我国《中华人民共和国农业部公告》第2625号中明确规定配合饲料中β-阿朴-8＇-β,β-胡萝卜素-4,4-二酮(斑蝥黄)的最高限量为25mg/kg。目前，我国对饲料中β-阿朴-8＇-β,β-胡萝卜素-4,4-二酮(斑蝥黄)检测的行业标准采用正向色谱法，该方法普适性差，造成饲料中着色剂的检测空白，增加了饲料产品质量安全问题和监管的不利。特别是在肉禽、蛋禽养殖过程中，养殖户和企业为了迎合消费者心理，追求外观色泽漂亮，肉鸡膘黄、脚黑，鸡蛋心红、亮，添加着色剂来改变色泽充当土鸡、土鸡蛋来追求高回报已为常态。着色剂在禽肉、饲料中大量蓄积、残留，增加了消费者的健康危害风险。[0003]β-阿朴-8＇-β,β-胡萝卜素-4,4-二酮(斑蝥黄)又叫角黄素，是一种带橙红色的类胡萝卜素色素。多作为动物饲料添加剂，使蛋黄和禽肉的颜色更加鲜明。用于食品添加时主要作为橙色着色剂，但极少使用。目前在对饲料斑蝥黄着色剂的检测中，由于样品中脂类和蛋白对结果的干扰，以及斑蝥黄着色剂本身不稳定的因素，使得饲料中斑蝥黄着色剂检测存在准