一种斑蝥素的含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113624887A(43)申请公布日2021.11.09(21)申请号202110959774.7(22)申请日2021.08.20(71)申请人江苏四环生物制药有限公司地址214400江苏省无锡市江阴市滨江开发区定山路10号(72)发明人江永红丁月萍刘红刘蕾陶冬梅(74)专利代理机构苏州国诚专利代理有限公司32293代理人王会(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/54(2006.01)G01N30/74(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称一种斑蝥素的含量测定方法(57)摘要本发明公开了一种斑蝥素的含量测定方法，包括以下步骤：先将斑蝥粉碎成20‑70目的斑蝥粉末，加水混匀后进行多次超声波提取，再酶解，加入丙酮溶液，超声波提取，丙酮溶液回收后得到斑蝥素，最后采用液相色谱测定斑蝥素含量。本发明将斑蝥粉碎后能够大大缩短后期提取时间，提取含量高，每次提取后均进行过滤，含杂率低，提高了斑蝥素提取纯度，设计流动相、对照溶液和供试品溶液，通过配合，进行色谱分析测定，可以准确的测定斑蝥素的含量，操作简单，重复性好，回收率良好，可以实现对斑蝥素的准确定量。CN113624887ACN113624887A权利要求书1/2页1.一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)、将斑蝥粉碎成20‑70目的斑蝥粉末，加水混匀，超声波提取2‑5次，过滤，合并滤渣；步骤2)、酶解，超声波振荡不小于6h，随后加入丙酮溶液，超声波提取30‑50min，过滤，合并滤液；步骤3)、回收丙酮溶液，得到斑蝥素；步骤4)、采用液相色谱测定斑蝥素含量步骤41)、流动相配制将甲醇与水按20‑30：75‑80体积比混匀，制成所需流动相；步骤42)、对照品溶液配制取一定量的斑蝥素对照品，置于容量瓶中，加甲醇稀释并定容；步骤43)、供试品溶液配制取一定量的步骤3)所得斑蝥素样品，置于容量瓶中，加甲醇溶解稀释并定容；步骤44)、色谱分析测定分别取一定量的空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪并分别记录液相色谱图，根据液相色谱图分析测定斑蝥素含量。2.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤1)中，将斑蝥粉碎成20‑40目的斑蝥粉末，每次加水量为斑蝥粉末重量的12‑16倍，斑蝥粉末与水先混合静置15‑25min，再进行超声波提取2‑5次。3.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤41)中，甲醇与水的体积比为23：77。4.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤42)中，对照品溶液浓度为0.6‑1.4mg/ml。5.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤43)中，供试品溶浓度为0.6‑1.4mg/ml。6.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤44)中，液相色谱仪采用的色谱柱为AgilentC18柱，所述色谱柱的规格为长度250mm、内径4.6mm、粒径5μm，采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂。7.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤44)中，色谱分析测定的条件为：色谱柱中的流动相为甲醇‑水溶液，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，色谱柱柱温为25℃，进样量为5μl。8.根据权利要求1所述的一种斑蝥素的含量测定方法，其特征在于，步骤44)中，斑蝥素含量按照以下公式计算得到：其中：2CN113624887A权利要求书2/2页A供：供试品溶液峰面积；A对：对照品溶液峰面积；W供：供试品称样量，g；W对：对照品称样量，g；V对：对照品溶液稀释倍数；V供：供试品溶液稀释倍数；P：对照品标示量。3CN113624887A说明书1/5页一种斑蝥素的含量测定方法技术领域[0001]本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种斑蝥素的含量测定方法。背景技术[0002]斑蝥，别名芫青、花斑毛等，是芫青科昆虫南方大斑蝥MylabrisphalerataPallas或黄黑小斑蝥MylabriscichoriiLinnaeus的干燥虫体，性寒味辛，为剧毒中药材。斑蝥外用能蚀死肌、敷疥癣恶疮，内服有攻毒、逐瘀散结、抗肿瘤等作用。现代医学研究证明，斑蝥的药用成分主要是斑蝥素，是一种具有特殊作用的天然活性物质。[0003]斑蝥素除具有抗恶性肿瘤等重要临床应用外，还可添加到生发类化妆品中，具有对皮肤止痒、改善局部神经营养及刺激毛根、促进毛发生长的作用，但由于毒性较大，在化妆品卫生标准对原料的要求中规定，生发类化妆品中斑蝥素的含量不允许超过1％，其他化妆品中不得含有