三氯杀螨醇半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110938007A(43)申请公布日2020.03.31(21)申请号201911061524.0C07K14/765(2006.01)(22)申请日2019.11.01C07K1/107(2006.01)C07K16/44(2006.01)(71)申请人深圳市易瑞生物技术股份有限公司G01N33/577(2006.01)地址518102广东省深圳市宝安区新安街G01N33/53(2006.01)道留仙一路2-1号易瑞生物园(72)发明人王西丽杨星星魏雄军邓启福杨中黎维杨林林付辉金虹李城张鑫(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人许青华(51)Int.Cl.C07C215/68(2006.01)C07C213/02(2006.01)C07K14/795(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图1页(54)发明名称三氯杀螨醇半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用(57)摘要本发明公开了三氯杀螨醇半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用，本发明首次公开了一种新型结构的三氯杀螨醇半抗原，该三氯杀螨醇半抗原与目标待测物三氯杀螨醇相似程度高，最大程度保留了三氯杀螨醇的特征结构，在三氯杀螨醇的苯氯基位置引入氨基，能更好地暴露半抗原的抗原决定簇，使得三氯杀螨醇半抗原的免疫原性明显增强，又具有可以与载体蛋白发生偶联的氨基；该三氯杀螨醇半抗原与载体蛋白偶联后得到的三氯杀螨醇免疫抗原去免疫动物，更有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体，经间接竞争ELISA检测三氯杀螨醇抗体的IC50为23.5ug/L，为后续建立三氯杀螨醇的各种免疫分析方法提供基础。CN110938007ACN110938007A权利要求书1/2页1.一种三氯杀螨醇半抗原，其特征在于，其具有式（）所示的结构：（）。2.如权利要求1所述三氯杀螨醇半抗原的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.在催化剂的催化作用下，（三氯甲基）三甲基硅烷与4-氯-3-硝基二苯甲酮发生反应，得到中间体1，所述中间体1具有结构式；S2.将所述中间体1进行水解反应，得到中间体2，所述中间体2具有结构式；S3.将所述中间体2进行还原反应，得到式（）所示结构的三氯杀螨醇半抗原。3.如权利要求2所述三氯杀螨醇半抗原的合成方法，其特征在于，所述步骤S1包括如下步骤：在反应器中先加入4-氯-3-硝基二苯甲酮、用DMF溶解的催化剂，再在室温下缓慢滴加DMF溶解的（三氯甲基）三甲基硅烷，滴加完毕之后，室温持续搅拌反应，反应结束后，加入水，用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相，有机相经蒸干后过柱纯化，得到中间体1。4.如权利要求3所述三氯杀螨醇半抗原的合成方法，其特征在于，所述催化剂选自甲酸钠、乙酸铵、碳酸钾、苯甲酸钠、和醋酸锂中的一种；所述（三氯甲基）三甲基硅烷和4-氯-3-硝基二苯甲酮的物质的量之比大于1。5.如权利要求2所述三氯杀螨醇半抗原的合成方法，其特征在于，所述步骤S2包括如下步骤：称取中间体1，用有机溶剂溶解后，加入酸性溶液，加热回流，进行水解反应；反应结束后蒸干有机溶剂，加水稀释，再用乙酸乙酯萃取，有机相经蒸干、过柱纯化后得到中间体2。6.如权利要求2所述三氯杀螨醇半抗原的合成方法，其特征在于，所述步骤S3包括如下步骤：称取中间体2，用有机溶剂溶解后，加入还原剂、氯化铵，再加入盐酸溶液，加热回流，进行还原反应；反应结束后蒸干有机溶剂，加碳酸氢钠溶液将溶液调为微碱性，再用乙酸乙酯萃取，有机相经蒸干、过柱纯化后得到式（）所示结构的三氯杀螨醇半抗原；其中，所述还原剂选自铁粉、锌粉、和镁粉中的一种。7.三氯杀螨醇人工抗原，其特征在于，所述三氯杀螨醇人工抗原包括三氯杀螨醇免疫抗原和三氯杀螨醇包被抗原，所述三氯杀螨醇免疫抗原和包被抗原均由权利要求1所述的式（）所示结构的三氯杀螨醇半抗原与载体蛋白偶联而成。2CN110938007A权利要求书2/2页8.如权利要求7所述的三氯杀螨醇人工抗原，其特征在于，上述三氯杀螨醇人工抗原的合成方法包括如下步骤：在反应容器中加入三氯杀螨醇半抗原和HCl，在冰水浴条件下加入亚硝酸钠溶液，反应制备得到重氮液；将载体蛋白和碳酸钠缓冲液滴入上述重氮液中，再反应一定时间后加入水，用PBS透析，离心分装冻存。9.一种三氯杀螨醇抗体，它是由权利要求7所述的三氯杀螨醇免疫抗原经动物免疫得到。10.一种如权利要求9所述的三氯杀螨醇抗体在检测三氯杀螨醇残留中的应用。3CN110938007A说明书1/9页三氯杀螨醇半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用技术领域[0001]本发明涉及免疫化学分析技术领域，特别是涉及了三氯杀螨醇半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用。背景技术[000