一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111337443A(43)申请公布日2020.06.26(21)申请号202010236630.4(22)申请日2020.03.30(71)申请人西安建筑科技大学地址710055陕西省西安市雁塔路13号(72)发明人黄悦楼程浩罗丽刘欣月王晓昌(74)专利代理机构西安智大知识产权代理事务所61215代理人王晶(51)Int.Cl.G01N21/31(2006.01)G01N21/64(2006.01)G01N1/28(2006.01)G01N1/34(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法(57)摘要一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，包括以下步骤；(1)预处理及色素测定方法：将培养中的藻液离心后，冷冻干燥后备用。精确称取藻粉分别置于管①和管②，在管①中加乙醇，水浴后离心，取上清液用以测定色素含量，剩余藻沉淀用于下一步测定。管①和管②中分别加入乙醇，水浴后离心脱色，倒掉上清液，重复上述步骤，保留管①和管②底部藻沉淀；(2)破碎方法：取步骤(1)获得的藻沉淀，管①采用碱性加热法、管②采用超声破碎法，破碎完成后，离心，用于下一步测定；(3)测定方法：取管①中的上清液，测定多糖，蛋白质；取管②中的上清液测定脂质，离心去上清，剩余样品用于淀粉含量测定。本发明具有简单、高效、低成本的特点。CN111337443ACN111337443A权利要求书1/2页1.一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，包括以下步骤；(1)预处理及色素测定方法：将培养中的藻液离心后收获，冷冻干燥后备用，精确称取藻粉分别置于管①和管②，在管①中加乙醇，水浴后离心，取上清液用以测定色素含量，剩余藻沉淀用于下一步测定。管①和管②中分别加入乙醇，水浴后离心脱色，倒掉上清液，重复上述步骤，保留管①和管②底部藻沉淀；(2)破碎方法：取步骤(1)获得的藻沉淀，管①采用碱性加热法、管②采用超声破碎法，破碎完成后，用于下一步测定；(3)测定方法：取管①中的上清液，测定多糖，测定蛋白质；取管②中的上清液测定脂质，离心，倒上清，剩余样品用于淀粉含量的测定。2.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，藻粉为(但不限于)普通小球藻、水华鱼腥藻和铜绿微囊藻，选取在不同生长条件下，处于各生长时期的微藻藻液，离心收集藻沉淀，真空冷冻干燥制成。3.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，分别称取①：1-20mg和②：1-20mg藻粉，在管①中按照藻粉质量(mg)：95％无水乙醇体积(mL)＝1：2-1：5的比例，在75℃下水浴5-10min，取出后4000-8000r·min-1下离心10-15min，取上清液用以测定色素含量，在管①和管②中分别加入藻粉质量(mg)：乙醇体积(mL)＝1：2-1：5的75％-95％的乙醇，65℃下水浴1-3h，取出后，重复离心步骤，用于藻粉脱色的乙醇浓度优选80％的无水乙醇进行。4.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中碱性加热法具体步骤如下：往预处理完之后的管①藻沉淀中加入藻粉质量(mg)：溶液体积(mL)＝1：1的2MNaOH溶液，，沸水浴10-15min分钟，取出冷却至室温，用2MHCl溶液调pH至7.1，4000-8000r·min-1下离心10-15min。5.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中超声破碎法具体步骤如下：往预处理完之后的管②藻沉淀中加入5-10mL的超纯水，在冰水浴的环境中用细胞破碎仪破碎，具体参数为破碎15-20min，功率180w，工作2s停2s，4000-8000r·min-1下离心10-15min。6.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，所述的步骤(3)取管①中的上清液，0.5mL测定多糖，1mL测定蛋白质；取管②中的上清液1mL测定脂质，4000-8000r·min-1下离心10-15min，倒上清，剩余样品用于淀粉含量测定。7.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定藻类生物质组成的方法，其特征在于：步骤(3)中测定多糖采用蒽酮比色法，具体步骤如下：取0.5mL管①上清液，在冰水浴环境中，加入2.5mL蒽酮溶液，摇匀后将比色管置于沸水浴中10-15min，取出于冰水浴中冷却，在紫外分光光度计下测定625nm波长处的吸光度。8.根据权利要求1所述的一套简便、高效测定微藻生物质组成的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中测定蛋白质采用