毕赤酵母宿主蛋白残留的检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111426843A(43)申请公布日2020.07.17(21)申请号202010176369.3(22)申请日2020.03.13(71)申请人东莞市东阳光生物药研发有限公司地址523871广东省东莞市长安镇长安振安中路368号3号楼214室申请人广东东阳光药业有限公司(72)发明人刘国良唐爽郭林峰谢灿冯艳徐军李晓平陈小锋李文佳(74)专利代理机构北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)11201代理人肖阳(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书2页说明书13页附图4页(54)发明名称毕赤酵母宿主蛋白残留的检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明提出一种宿主蛋白残留的检测试剂盒。该试剂盒包括：多克隆抗体以及任选的生物标记的多克隆抗体，所述多克隆抗体特异性识别所述宿主蛋白，其中，所述多克隆抗体是通过如下方式获得的：利用抗原对第一待免疫动物进行主动免疫，以便获得第一含有抗体的血清；利用所述第一含有抗体的血清对第二待免疫动物进行被动免疫，以便获得第二含有抗体的血清；将含有第二抗体的血清进行纯化处理，以便获得第二抗体，所述多克隆抗体包括所述第二抗体。利用根据本发明实施例的试剂盒检测生物药产品中的宿主蛋白的残留，灵敏度和准确度均显著提高。CN111426843ACN111426843A权利要求书1/2页1.一种宿主蛋白残留的检测试剂盒，其特征在于，包括：多克隆抗体以及任选的生物标记的多克隆抗体，所述多克隆抗体特异性识别所述宿主蛋白；其中，所述多克隆抗体是通过如下方式获得的：利用抗原对第一待免疫动物进行主动免疫，以便获得第一含有抗体的血清；利用所述第一含有抗体的血清对第二待免疫动物进行被动免疫，以便获得第二含有抗体的血清；将含有第二抗体的血清进行纯化处理，以便获得第二抗体，所述多克隆抗体包括所述第二抗体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括将第一含有抗体的血清进行纯化处理，以便获得第一抗体；将第一抗体与所述第二抗体混合，以便获得所述多克隆抗体。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原为细胞全蛋白HCPs，任选地，所述抗原为发酵工程菌HCPs，任选地，所述抗原为毕赤酵母HCPs，任选地，所述第一待免疫动物和/或第二待免疫动物为新西兰大白兔。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，进行被动免疫前，进一步包括将所述第一含有抗体的血清进行稀释处理，任选地，所述稀释处理的倍数为2～4倍，优选地，3倍。5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，当血清中抗体滴度至少达到50万时，分别对第一含有抗体的血清和第二含有抗体的血清进行纯化处理；优选地，血清中抗体滴度不超过400万。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原与所述第一待免疫动物个体的质量比1:1～3:2。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一含有抗体的血清与所述第二待免疫动物个体的体积质量比为1:20～1:90。8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括抗体稀释液、样品稀释液、reagentA、reagentB或PBST溶液；任选地，所述抗体稀释液为碳酸钠和碳酸氢钠的水溶液，所述抗体稀释液的pH为9.5～9.7；任选地，所述样品稀释液为BSA的水溶液，所述样品稀释液的pH为7.2～7.4；任选地，所述reagentA为Streptavidin；任选地，所述reagentB为Biotin-HRP；任选地，所述PBST溶液为PBS和吐温-20的水溶液。9.一种检测待测样品中毕赤酵母宿主蛋白残留的方法，其特征在于，利用权利要求1～8任一项所述的试剂盒，对待测样品按照预定操作进行孵育处理；将孵育处理后的待测样品进行酶标检测，以便获得吸光值；基于所获得的吸光值以及吸光值-蛋白浓度标准曲线，获得所述待测样品中的宿主蛋白残留量。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述对待测样品按照预定操作进行孵育处理包括：2CN111426843A权利要求书2/2页(1)利用多克隆抗体对酶标板进行覆盖处理；(2)利用封闭液对覆盖处理后的酶标板进行封闭处理；(3)将待测样品加入封闭处理后的酶标板中进行第一孵育处理；(4)将第一孵育处理后的酶标板进行第一清洗处理；(5)将生物素标记的多克隆抗体加入第一清洗处理后的酶标板进行第二孵育处理；(6)将第二孵育处理后的酶标板进行第二清洗处理；(7)将SABC-HRP工作液加入第二清洗处理后的酶标板进行第三孵育处理；(8)将第三孵育处理后的酶标板进行第三清洗处理；(9)将第三清洗处理产物进行显色反应。11.一种检测待测样品中毕赤酵母宿主蛋白残留的方法，其特征在于，(