盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115466318A(43)申请公布日2022.12.13(21)申请号202210725229.6A01H6/78(2018.01)(22)申请日2022.06.24A23B7/154(2006.01)A23B7/155(2006.01)(71)申请人西南大学C12R1/01(2006.01)地址400715重庆市北碚区天生路2号(72)发明人曾凯芳陈鸥姚世响易兰花朱容(74)专利代理机构北京汇泽知识产权代理有限公司11228专利代理师武君(51)Int.Cl.C07K14/39(2006.01)C12N15/31(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12N15/84(2006.01)A01H5/08(2018.01)权利要求书1页说明书3页序列表3页附图2页(54)发明名称盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1及其应用(57)摘要本发明公开了氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1及其在制备诱导柑橘果实抗病性的保鲜剂中的应用，研究结果证实，农杆菌介导的遗传转化在柑橘果实上瞬时表达分泌蛋白PgAsp1，能一定程度抑制柑橘果实绿霉病的发病和病斑直径的增长；本发明从盔形毕赤酵母中挖掘出具有诱导柑橘果实抗病性的分泌蛋白PgAsp1，不仅丰富了盔形毕赤酵母诱导柑橘果实抗病性的机理，拓宽了拮抗酵母在果实保鲜领域的应用方式，也为柑橘果实采后绿霉病的防治提供了新的解决方法。CN115466318ACN115466318A权利要求书1/1页1.盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。2.权利要求1所述盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1的编码基因。3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。4.含有权利要求2所述编码基因的重组表达载体。5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：是将核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1的编码基因克隆入植物表达载体pCAMBIA2300的多克隆位点KpnI和PstI之间而得到。6.含有权利要求4所述重组表达载体的工程菌。7.如权利要求6所述的工程菌，其特征在于，是将所述重组表达载体转入农杆菌GV3101中而得到。8.权利要求1所述的盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1或权利要求6所述的工程菌在制备诱导柑橘果实抗病性的保鲜剂中的应用。9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述诱导柑橘果实抗病性为诱导柑橘果实绿霉病抗病性。2CN115466318A说明书1/3页盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1及其应用技术领域[0001]本发明属于基因工程技术和果实采后病害生物防治技术领域，涉及盔形毕赤酵母(Pichiagaleiformis)分泌蛋白PgAsp1及其应用。背景技术[0002]拮抗酵母是果实采后病害防治中常用的生物防治拮抗菌。已有大量文献报道拮抗酵母能诱导果实抗病性，涉及果实多种抗病基因的表达、激素合成和信号转导途径、抗病相关物质的合成等。然而，拮抗酵母分泌蛋白对果实抗病性的作用还不清楚。[0003]柑橘是芸香科柑橘亚科柑橘属植物，是世界和中国产量最多的水果。新鲜柑橘果实在采后运输、贮藏等过程中极易受微生物侵染，损失可达总产量的30％以上。由真菌指状青霉(Penicilliumdigitatum)引起的绿霉病是柑橘果实贮藏过程中主要的侵染性病害。目前产业上主要采用咪鲜胺等化学杀菌剂控制果实采后病害，但存在杀菌剂残留、微生物产生耐药性等问题。发明内容[0004]本发明的目的在于探究和明确拮抗酵母分泌蛋白在诱导果实抗病性中的作用，以期为果实采后病害的防治提供新的解决方案。[0005]经研究，本发明提供如下技术方案：[0006]1.盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1，氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。[0007]2.盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1的编码基因。[0008]进一步，所述编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。[0009]3.含有盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1编码基因的重组表达载体。[0010]进一步，所述重组表达载体是将核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1编码基因克隆入植物表达载体pCAMBIA2300的多克隆位点KpnI和PstI之间而得到。[0011]4.含有上述重组表达载体的工程菌。[0012]进一步，所述工程菌是将含有盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1编码基因的重组表达载体转入农杆菌GV3101中而得到。[0013]5.盔形毕赤酵母分泌蛋白PgAsp1在制备诱导柑橘果实抗病性的保鲜剂中的应用。[0014]进一步，所述诱导柑橘果实抗病性为诱导柑橘果实绿霉病抗