一种用于蛋白沉淀的装置及从蛋白混合液中分离纯化目的蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111471084A(43)申请公布日2020.07.31(21)申请号201910064297.0(22)申请日2019.01.23(71)申请人中国科学院青岛生物能源与过程研究所地址266101山东省青岛市崂山区松岭路189号(72)发明人樊喜英刘文帅年锐孙粤包子娴咸漠(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211代理人邓宇(51)Int.Cl.C07K1/36(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图4页(54)发明名称一种用于蛋白沉淀的装置及从蛋白混合液中分离纯化目的蛋白的方法(57)摘要一种用于蛋白沉淀的装置及从蛋白混合液中分离纯化目的蛋白的方法，属于蛋白纯化技术领域。为解决现有沉淀盐纯化蛋白的过程中引发的以下问题：1)局部盐浓度过大引起蛋白质分子发生变性问题；2)因为沉淀盐和蛋白混合液混合不均发生盐析现象。本发明提供了一种沉淀盐溶液与蛋白混合液充分混匀的装置，利用该装置对沉淀盐溶液纯化目的蛋白的过程进行优化，过滤去除未发生沉淀的蛋白，同时截留已经沉淀的目的蛋白于滤膜中，有效简化纯化流程同时可用于大体积的蛋白纯化。经过该装置沉淀的目的蛋白再经过一步离子交换色谱柱的纯化，即可将杂蛋白全部去除，得到纯度达95％以上的目的蛋白，具有极高的经济效益，本发明可用于蛋白分离与纯化。CN111471084ACN111471084A权利要求书1/1页1.一种用于蛋白沉淀的装置，其特征在于，包括溶剂瓶A、溶剂瓶B、溶剂瓶C、溶剂瓶D、速度控制器(1)、预混容器(2)、蠕动装置(3)、抽动泵E(4)、抽动泵F(6)和过滤装置(5)；其中：溶剂瓶A用于盛放蛋白混合液；溶剂瓶B用于盛放沉淀盐溶液；溶剂瓶C用于盛放溶解缓冲液；溶剂瓶D用于收集经过滤装置(5)过滤获得的蛋白溶解液；所述速度控制器(1)用于控制所在导管内液体流速；所述预混容器(2)为三通结构，包括2个进料口和1个出料口，其中2个进料口分别与速度控制器(1)的出料端连接，速度控制器(1)的进料端分别插入溶剂瓶A和溶剂瓶B的液面以下，预混容器(2)的出料口与蠕动装置(3)的进料端连接，蠕动装置(3)的出料端通过抽动泵E(4)与过滤装置(5)的进料口连接；抽动泵F(6)的进料口插入至溶剂瓶C液面以下，抽动泵F(6)的出料口与过滤装置(5)的进料口连接；过滤装置(5)的出料口插入到溶剂瓶D中。2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述蠕动装置(3)为内部设有铁丝或塑料材质的丝网或条状结构的蠕动管。3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述过滤装置(5)上设置有孔径大小为0.22μm的过滤网。4.一种利用权利要求1-3任意一项所述的装置从蛋白混合液中分离纯化目的蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)沉淀蛋白：将蛋白混合液装入溶剂瓶A中，沉淀盐溶液装入溶剂瓶B中，打开抽动泵E(4)，利用速度控制器(1)控制所在导管内液体流速，溶剂瓶A和溶剂瓶B内液体在预混容器(2)内进行混合，混合液再经过蠕动装置(3)进行混匀；随后混匀液经过滤装置(5)过滤，在过滤装置(5)上获得发生沉淀的目的蛋白；所述蛋白混合液和沉淀盐溶液的体积比例为(1：1)～(1：4)；所述沉淀盐溶液选自硫酸铵盐溶液、硫酸钠盐溶液、柠檬酸钠盐溶液、柠檬酸钾盐溶液和磷酸钾盐溶液中的一种，浓度为2～4M；2)溶解蛋白：打开抽动泵F(6)，从溶剂瓶C中抽取溶解缓冲液，溶解过滤装置(5)上沉淀的目的蛋白，蛋白溶解液收集至溶剂瓶D中；3)然后纯化获得目的蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)所述蛋白混合液和沉淀盐溶液的体积比例为1：3，所述沉淀盐溶液为硫酸铵盐溶液或柠檬酸钠盐溶液，浓度为3M。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)所述溶解缓冲液选自磷酸缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种，溶解缓冲液使用体积与蛋白混合液体积比例是2：1。7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤3)所述纯化是指利用离子交换色谱柱进行纯化。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述离子交换色谱柱为阳离子交换色谱柱、阴离子交换色谱柱、弱阳离子交换色谱柱、弱阴离子交换色谱柱或复合型离子交换色谱柱。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述离子交换色谱柱为复合型离子交换色谱柱CaptoMMC或Captoadhere。10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，若缓冲液pH大于目的蛋白等电点pI，目的蛋白带负电荷，选择阴离子交换色谱柱；若缓冲液pH小于目的蛋白等电点pI，目的蛋白带正电荷，选择阳离子交换色谱柱。2CN111471084A说明