目的蛋白纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113845562A(43)申请公布日2021.12.28(21)申请号202010599848.6(22)申请日2020.06.28(71)申请人佛山汉腾生物科技有限公司地址528315广东省佛山市顺德区乐从镇岭南大道南2号中欧中心A栋5层511室申请人广州汉腾生物科技有限公司(72)发明人赵雪冰王妮(74)专利代理机构北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)11201代理人肖阳(51)Int.Cl.C07K1/22(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称目的蛋白纯化方法(57)摘要本发明提供了一种目的蛋白纯化方法。该方法包括：利用洗脱缓冲液对亲和层析柱进行洗脱处理，以便获得含有目的蛋白的洗脱液，所述亲和层析柱加载有待测样品，所述待测样品中含有待纯化目的蛋白，其中，所述洗脱缓冲液中含有非离子表面活性剂。利用本发明提供的方法进行目的蛋白亲和层析，可以显著提高洗脱蛋白质的纯度，抑制洗脱过程中多聚体的产生，提高蛋白回收率。CN113845562ACN113845562A权利要求书1/1页1.一种目的蛋白纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：利用洗脱缓冲液对亲和层析柱进行洗脱处理，以便获得含有目的蛋白的洗脱液，所述亲和层析柱加载有待测样品，所述待测样品中含有待纯化目的蛋白，其中，所述洗脱缓冲液中含有非离子表面活性剂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂包括吐温和曲拉通至少之一。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述吐温包括吐温80、吐温20的至少之一。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂在所述洗脱缓冲液中的体积分数为0.5％～2％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括柠檬酸缓冲液、乙酸盐缓冲液和甘氨酸缓冲液的至少一种。6.根据权利要求2～5任一项所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液的pH为3～4，优选地，所述洗脱缓冲液的pH为3.4～3.6。7.根据权利要去1所述的方法，其特征在于，使用预装有中和液的容器收集所述洗脱液。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括选自发酵液和细胞培养物的至少之一。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述亲和层析柱为ProteinA亲和层析柱、ProteinG亲和层析柱或ProteinL亲和层析柱。10.一种通过ProteinA亲和层析柱纯化目的蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用洗脱缓冲液对所述亲和层析柱进行洗脱处理，以便获得含有目的蛋白的洗脱液，所述亲和层析柱加载有待测样品，所述待测样品中含有待纯化目的蛋白，其中，所述洗脱缓冲液为100mM柠檬酸缓冲液，所述洗脱缓冲液含有0.5体积％～2体积％的非离子表面活性剂，所述洗脱缓冲液的pH为3.4～3.6，所述待测样品为细胞培养物；任选地，所述非离子表面活性剂包括吐温和曲拉通至少之一；任选地，所述吐温包括吐温80、吐温20的至少之一。2CN113845562A说明书1/6页目的蛋白纯化方法技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及一种目的蛋白纯化方法。背景技术[0002]蛋白质亲和层析技术适用于理化性质差异较小而难分离的蛋白质，亲和层析利用固相介质中的配基与混合生物分子之间亲和能力不同而进行分离，当蛋白混合液通过层析柱时，与配基能够特异性结合的蛋白质就会被吸附固定在层析柱中，这种结合在一定条件下是可逆的，待亲和层析结束后，可被洗脱缓冲液洗脱，而其他对配基不具有特异性结合能力的蛋白在上样与洗涤过程中即通过柱体而流穿，不能结合于柱体上。蛋白质亲和层析技术通过目标蛋白质与配体间特异性亲和结合而达到分离纯化的目的，具有生物专一性的特点。[0003]但有些类型的蛋白尤其是Fc融合蛋白在酸性溶液中进行蛋白亲和层析纯化时，容易形成聚集体甚至形成可见的沉淀，而造成纯化后获得蛋白的纯度和回收率低。[0004]因此，利用蛋白亲和层析技术进行蛋白纯化的方法仍需要进一步开发和改进。发明内容[0005]本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够抑制蛋白亲和层析洗脱过程中多聚体的产生，提高目的蛋白的纯度，提高目的蛋白回收率的方法。[0006]在本发明的第一方面，本发明提出了一种目的蛋白纯化方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：利用洗脱缓冲液对亲和层析柱进行洗脱处理，以便获得含有目的蛋白的洗脱液，所述亲和层析柱加载有待测样品，所述待测样品中含有待纯化目的蛋白，其中，所述洗脱缓冲液中含有非离子表面活性剂。发明人意外地发现，在洗脱缓冲液中加入非离子表面活性剂，洗脱过程中不易产生蛋白多聚体，可大幅提高目的蛋白的纯度