去免疫化的因子VIII分子以及包含其的药物组合物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112119158A(43)申请公布日2020.12.22(21)申请号201980031302.6(74)专利代理机构北京市金杜律师事务所(22)申请日2019.04.1111256代理人陈文平(30)优先权数据18166982.12018.04.12EP(51)Int.Cl.C12N9/64(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日2020.11.09(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2019/0592332019.04.11(87)PCT国际申请的公布数据WO2019/197524EN2019.10.17(71)申请人生物测试股份公司地址德国德赖艾希(72)发明人K·温特林S·基斯特纳J·道芬巴赫A·德格鲁特权利要求书4页说明书35页W·马丁C·昂格雷尔序列表79页附图12页(54)发明名称去免疫化的因子VIII分子以及包含其的药物组合物(57)摘要本发明涉及治疗性蛋白领域，尤其涉及重组凝血因子。其提供了在限定位置包含特定点突变的重组因子VIII(FVIII)蛋白，所述特定点突变用于降低所述FVIII蛋白的免疫原性，其中所述因子VIII蛋白基本上保留了其凝血活性。其还提供了编码所述去免疫化的蛋白的核酸、细胞系和重组制备方法以及包含本发明的重组FVIII的药物组合物，其对于用于治疗甲型血友病患者(特别是尚未使用FVIII产品治疗过的患者)是有利的。另外，对于此前已治疗的患者，甚至对于已经对FVIII(例如，对于免疫耐受诱导疗法(ITI/ITT)或挽救ITI)产生免疫应答的患者，其均是安全的选择。本发明还提供了用于确定蛋白免疫原性的测定。CN112119158ACN112119158A权利要求书1/4页1.一种重组因子VIII蛋白，其在选自以下的位置包含至少三个氨基酸置换：Y748、L171、S507、N79、I80、I105、S112、L160、V184、N233、L235、V257、I265、N299、Y426、Y430、L505、F555、I610、N616、I632、L706、N754、K1837、R1936、S2030、S2037、N2038、S2077、M2123、S2125、F2215、K2226、K2258、V2313、S2315、V2333和Q2335；其中N的置换独立地选自以下：D、H、S和E；其中I的置换独立地选自以下：T和V；其中S的置换独立地选自以下：A、N、G、T和E；其中L的置换独立地选自以下：N、Q、F和S；其中V的置换独立地选自以下：A和T；其中Y的置换独立地选自以下：N、H和S；其中F的置换独立地选自以下：H和S；其中K的置换独立地选自以下：N、D、E、Q、S和T；其中R的置换独立地选自以下：Q、H和S；其中M的置换选自以下：R、Q、K和T；和/或其中Q的置换选自以下：R、D、E、H和K；其中所述位置是相对于SEQIDNO:1所示的全长人因子VIII分子而指定的；和其中与由SEQIDNO:2组成的因子VIII蛋白相比，如在显色测定中所确定的，所述重组因子VIII蛋白保留了至少50％的凝血活性，或者所述重组因子VIII蛋白的融合蛋白。2.根据权利要求1所述的重组因子VIII蛋白，其中所述氨基酸置换选自以下：Y748S、L171Q、S507E、N79S、I80T、I105V、S112T、L160S、V184A、N233D、L235F、V257A、I265T、N299D、Y426H、Y430H、L505N、F555H、I610T、N616E、I632T、L706N、N754D、K1837E、R1936Q、S2030A、S2037G、N2038D、S2077G、M2123K、S2125G、F2215H、K2226Q、K2258Q、V2313A、S2315T、V2333A和Q2335H。3.根据前述任一项权利要求所述的重组因子VIII蛋白，其中所述重组因子VIII蛋白包含所述置换中的3-25个和所述置换位于不同的免疫原性簇内。4.根据前述任一项权利要求所述的重组因子VIII蛋白，其在选自以下的位置包含至少三个氨基酸置换：Y748、L171、S507、N79、S112、L160、V184、N233、I265、N299、Y426、F555、N616、I632、L706、K1837、R1936、N2038、S2077、S2125、F2215、K2226、K2258、S2315和V2333；其中所述至少三个氨基酸置换优选地选自以下：Y748S、L171Q、S507E、N79S、S112T、L160S、V184A、N233D、I265T、N299D、Y426H、F555H、N616E、I632T、L706N、K