一种靶向Frizzled7人源化抗体及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112175083A(43)申请公布日2021.01.05(21)申请号202011049052.X(51)Int.Cl.(22)申请日2019.11.06C07K16/28(2006.01)C12N15/13(2006.01)(62)分案原申请数据A61K39/395(2006.01)201911078254.42019.11.06A61K47/68(2017.01)(83)生物保藏信息A61K51/10(2006.01)CCTCCNO:C20192792019.10.30A61P35/00(2006.01)(71)申请人上海健康医学院地址201318上海市浦东新区周祝公路279号(72)发明人解伟黄钢王进张坤驰孙吉张艳王风仙赵慧杰黄燕娟(74)专利代理机构上海科盛知识产权代理有限公司31225代理人褚明伟权利要求书1页说明书16页序列表13页附图14页(54)发明名称一种靶向Frizzled7人源化抗体及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及一种靶向Frizzled7人源化抗体及其制备方法与应用。所述靶向Frizzled7人源化抗体具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区氨基酸序列如SEQIDNo.11所示，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNo.12所示。本发明的靶向Frizzled7人源化抗体SHH002‑hu1保留了鼠源单抗SHH002与重组人Fzd7蛋白的高亲和力(KD值均小于1×10‑12M)，与Fzd7特异性结合，且与Fzd家族其他受体没有交叉反应，降低了抗体在可能的临床应用中的脱靶风险。SHH002‑hu1可以与肿瘤细胞表面Fzd7结合，阻断Wnt信号通路；并可以与病人肿瘤组织中的Fzd7有效结合，具有潜在的肿瘤靶向性，是未来抗肿瘤治疗新的候选药物。CN112175083ACN112175083A权利要求书1/1页1.一种靶向Frizzled7人源化抗体，其特征在于，所述靶向Frizzled7人源化抗体具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区氨基酸序列如SEQIDNo.13所示，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNo.14所示。2.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：(i)如权利要求1所述抗体；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。3.一种核苷酸，其特征在于，所述核苷酸编码选自下组的多肽：(1)如权利要求1所述的抗体；或(2)如权利要求2所述的重组蛋白。4.一种表达载体，其特征在于，含有如权利要求3所述核苷酸。5.一种重组宿主细胞，其特征在于，含有如权利要求4所述表达载体。6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：权利要求1所述的抗体。7.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：(a)权利要求1所述的抗体或抗体片段，或权利要求2所述的重组蛋白；和(b)药物的偶联部分，所述药物选自可检测标记物、毒素、细胞因子、放射性核素或酶。8.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物包含权利要求1所述的抗体或抗体片段、权利要求2所述的重组蛋白或权利要求7所述免疫偶联物；以及药学上可以接受的载体。9.权利要求1所述抗体在制备治疗肿瘤药物中的应用。2CN112175083A说明书1/16页一种靶向Frizzled7人源化抗体及其制备方法与应用[0001]本申请是分案申请，本分案申请的母案申请日为2019年11月6日，申请号为201911078254.4，发明名称为“一种靶向Frizzled7人源化抗体及其制备方法与应用”。技术领域[0002]本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种靶向Frizzled7人源化抗体及其制备方法与应用。背景技术[0003]Wnt信号通路是一类在物种进化过程中高度保守的信号通路，其在动物胚胎的早期发育、器官形成和肿瘤的发生发展中，发挥至关重要的作用。Wnt蛋白家族与受体Frizzled(Fzd)的N端胞外结构区CRD(cysteine-richdomain)结合，与Dvl(disheveled)蛋白相互作用并激活下游信号通路。Fzd蛋白是一类具有七次跨膜分子结构的Wnt受体家族，该家族中有10个成员蛋白，Frizzled-7(Fzd7)为成员之一。研究表明Wnt受体Fzd7异常表达于不同种类的癌症中(包括三阴性乳腺癌(TNBC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肝癌(HCC)等)(PolakisP,2012,EMBOJ,31:2737-46；KingTDetal,2012,JCellBiochem,113:13-8)；Fzd7通过激活经典Wnt通路(Wnt/β-catenin)来诱导肿瘤的发生和转移。[0004]Wnt通路参与肿瘤的侵袭和转移，且对肿瘤血管生成也有调节作用，对Fzd7进行基因敲除