大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察.docx

大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察作者：宋嵬曾水林朱建宝王磊李升阎荣李凤飞【关键词】大鼠；神经前体细胞；神经节脊；细胞培养技术；免疫荧光组织化学Observationofneuralprecursorcellsinratdorsalrootganglia【Abstract】AIM:Toinvestigateneuralprecursorcellsinratdorsalrootganglia(DRG).METHODS:DRGfromembryonicandadultratswerefrozenandslicedforBrduNestinP75immunofluorescencehistochemicaltest.Additionallythecellsofgangliawererespectivelyculturedandobservedintheirproliferationanddifferentiation.ThecellswereidentifiedbyBrduNestinP75NFandGFAPimmunofluorescencehistochemicaltest.RESULTS:InthefrozenDRGsectionsfromadultandembryonicratsBrdu/NestinandNestin/P75positivecellswerefound.TheculturedcellscoulddivideandproliferateandshowedNestinBrduP75positive.Thethirdpassagecellscoulddifferentiateinthepresenceoffetalbovineserum.ThedifferentiatingcellsshowedNFandGFAPpositive.CONCLUSION:ThereareneuralprecursorcellsthatcandivideandproliferateinratDRG.Theycandifferentiateintoneuronandglialcells.【Keywords】rats;neuralprecursorcells;gangliaspinal;cellculturetechniques;immunofluorescencehistochemistry【摘要】目的：探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)内是否存在神经前体细胞.方法：取成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片进行BrduNestinP75免疫荧光组织化学检测分别取成年和胚胎大鼠DRG进行原代细胞培养观察其增殖与分化情况并行Nestin免疫组织化学和BrduP75NFGFAP免疫荧光组织化学鉴定.结果：在成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片上均见有Brdu/Nestin和Nestin/P75免疫荧光双标细胞.细胞培养观察到取自DRG的细胞有分裂增殖呈Nestin免疫组织化学阳性反应和BrduP75免疫荧光组织化学阳性反应；培养第三代细胞加入胎牛血清后出现分化分化细胞呈NF和GFAP免疫荧光组织化学阳性反应.结论：大鼠DRG内存在有分裂增殖的神经前体细胞这些细胞可以分化为神经元和神经胶质细胞.【关键词】大鼠；神经前体细胞；神经节脊；细胞培养技术；免疫荧光组织化学0引言成年动物的中枢神经系统内存在有神经干细胞（neuralstemcellsNSCs）已成为公认的事实这些细胞可以自我更新分裂增殖并且向神经元与神经胶质细胞分化［1-2］.NSCs的发现给神经系统损伤的修复带来了希望.随着研究的深入人们认识到干细胞广泛存在于体内.但外周神经系统是否存在NSCs的研究报道甚少.我们用免疫组织化学和细胞培养的方法观察了成年和胚胎大鼠脊髓背根神经节（dorsalrootgangliaDRG）内神经前体细胞.对哺乳动物外用内神经前体细胞进行了有益的探索.1材料和方法1.1材料健康孕14d和成年SD大鼠东南大学医学院实验动物中心提供；细胞培养主要试剂：DMEM/F12(1∶1)N2无血清培养液添加剂B27表皮生长因子（epidermalgrowthfactorEGF）碱性成纤维细胞生长