一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112226426A(43)申请公布日2021.01.15(21)申请号202011286259.9A61P1/04(2006.01)(22)申请日2020.11.17A61P1/14(2006.01)A61P1/12(2006.01)(71)申请人中国科学院新疆理化技术研究所A23C19/04(2006.01)地址830011新疆维吾尔自治区乌鲁木齐A23L29/00(2016.01)市北京南路40号附1号(72)发明人阿布力米提·伊力阿吉艾克拜尔·艾萨赵新民艾合米丁·外力阿米娜·艾尔肯高彦华(74)专利代理机构乌鲁木齐中科新兴专利事务所(普通合伙)65106代理人张莉(51)Int.Cl.C12N9/64(2006.01)A61K38/48(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图1页(54)发明名称一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法(57)摘要本发明涉及一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，该方法通过提取前皱胃的撕碎粒度，浸泡等处理方法使羔羊皱胃组织分散，细胞破坏，强化混合，再结合超声波协助提取方法显著提高了凝乳酶的提取率,大大缩短了提取时间，降低了凝乳酶制备的成本，为相关企业的羔羊胃提取物的规范化生产提供了技术支撑。同时，系统研究羔羊胃中凝乳酶的溶解性，选择了最佳的溶剂和提取pH值，为凝乳酶提取的放大生产提供了可靠，可行的方法。该方法得到的羔羊皱胃凝乳酶纯度高，生物活性强，而且提取方法简单可行，提取全程在低温环境下操作，更好的保留了羔羊胃凝乳酶的活性，获得的凝乳酶可应用于干酪生产中的用途。CN112226426ACN112226426A权利要求书1/1页1.一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，其特征在于按下列步骤进行：a、选用羔羊，屠宰后取出皱胃，用预冷蒸馏水流水冲洗除去皱胃中的杂物，置于温度-20℃冰箱保存备用；b、将步骤a中清洗过的羔羊皱胃，剥除脂肪及结缔组织，切成150x150mm的正方形，在温度-80℃下冷冻12个小时，然后冷冻干燥，再用粉碎机粉碎成5-8mm的羊皱胃粉末状，置于-20℃冰箱保存备用；c、将步骤b中的羊皱胃粉末，温度4℃下加入石油醚，并机械搅拌进行脱脂，脱脂2次，加入20倍体积的蒸馏水，在温度18℃浸泡10-60min；d、将步骤c中所得到的浸泡液体用氯化钠调至终浓度为1-10%氯化钠溶液，用1moL/L的盐酸溶液调节pH值为5.6，并用超声波辅助搅拌提取，超声功率为200瓦，超声时间为20分钟，提取温度为15℃，得到羊皱胃提取液，采用制冷机对羊皱胃提取液进行冷却，保持提取液的稳定温度4℃；e、将步骤d所得提取液用1moL/L的盐酸溶液调节pH值为3.3，温度-4℃下进行活化，时间7小时；f、将步骤e中活化后的提取液用1moL/L的氢氧化钠溶液调节pH值为5.6，液浓缩、冷冻干燥，即得到羔羊皱胃凝乳酶，以干粉重量g为单位测定羔羊皱胃凝乳酶的产率，并进行酶活力测定。2.根据权利要求1所述方法获得的羔羊皱胃凝乳酶在制备干酪生产中的用途。3.根据权利要求1所述方法获得的羔羊皱胃凝乳酶在制备治疗慢性胃炎、腹胀以及腹泻的药物中的用途。4.根据权利要求1所述方法获得的羔羊皱胃凝乳酶在制备食品中的用途。2CN112226426A说明书1/9页一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法技术领域[0001]本发明涉及一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法。背景技术[0002]凝乳酶(chymosin)，是新生哺乳动物胃黏膜以无活性的前体物—凝乳酶原形式分泌的一种具有催化凝乳作用的酸性蛋白酶，在胃液酸性环境中，凝乳酶原从N-端释放一部分肽段，形成不可逆的活性酶—凝乳酶。凝乳酶是干酪生产中主要的凝乳剂，具有高的凝乳活性和低的蛋白水解活性，特别适用于干酪的生产，其主要作用是分解乳中к-酪蛋白(к-casein)Phe105-Met106肽键，形成副-к-酪蛋白(Para-к-casein)和糖巨肽(glycomarcopeptide)，使酪蛋白胶粒失去稳定性，在Ca2+参与下使乳凝固，形成凝乳(Curd)；同时凝乳酶也参与干酪的成熟过程，对干酪质地和风味的形成有重要的作用。[0003]全世界许多干酪品种使用最广泛的凝乳酶是从小牛皱胃中提取的小牛皱胃酶，它具有良好的加工特性，并用其生产的干酪在风味，质地和产量方面都优于其它酶类。因此，人们就大量屠宰小牛获得小牛皱胃酶，以满足干酪生产的需要。随着干酪产量的增加，对凝乳酶的需求量不断增大，小牛皱胃酶供应短缺，价格上涨，而成年牛胃中皱胃酶的含量又较少，这就迫使科学家们千方百计地寻找小牛皱胃酶的代用品。目前干酪生产所用的凝乳酶大致可分为四大类动物凝乳酶，植物凝乳酶和微生物凝乳酶。[0004]动物凝乳酶是干酪生产中使用最早的