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羔羊皱胃酶制备工艺和部分性质的研究
一、引言
羊是一种重要的畜牧生产动物，在我国的养殖中占有重要位置。羔羊皱胃中含有丰富的天然酶，其中对蛋白质的降解作用最为显著的是羊皱胃中的胃蛋白酶和隆起胃中的胃蛋白酶。在传统的食品加工和制药生产过程中，这些天然酶起着十分重要的作用。本文主要研究羔羊皱胃酶的制备工艺和部分性质，旨在为该酶的应用提供一些科学依据。
二、羔羊皱胃酶制备工艺
1.试验材料的准备
本实验采集羊皱胃或羊隆起胃，清洗干净、切碎、加入适量的生理盐水，以4℃冷库反复冷冻，解冻，直至样品细胞破裂释放出酶。
2.酶的制备方法
(1)酶的提纯：比较常用的方法为硫酸铵饱和度调节和硫酸铵沉淀法。本实验采用硫酸铵饱和度调节法，系统配合度调节至Ⅳ度，15000r/min离心15min。将沉淀物取出，在生理盐水中悬浮并调整pH至最适酶活力值周围的值，再通过滤纸，进行一系列的清洗工作，检测至纯度达到90%或以上。
(2)酶的保存：将制得的酶液以乙醇或异丙醇等有机溶剂质量分数为50~60%，冷冻条件下保存备用。
3.酶学性质的测定
(1)酶活力的测定：酶活力测定可采用对天然基质的磷酸酯酶作用活力测定。测定如下：在安全柜内，荧光底板上分别加入10μl酶液、30μlL-链球菌酶作用基质、158μl背景缓冲液，室温孵育20min后，加入200μl荧光子底物，摇晃混合后，40℃孵育10min即可测定。
(2)催化活性上升曲线的绘制：使用硫酸铵沉淀的酶与NAC6H4-CHO-NH-2GH添加再生水混合。紫外分光光度计测定于(λ-ε)=(1.42-2.03)×104M-1cm-1波长下。初始速率通过斜率率进行烯式化反应速度的第二个通道计算而得。
三、羔羊皱胃酶部分性质的研究
1.稳定性
稳定性测定表明，羊皱胃酶在pH2.0-9.0范围内较为稳定，稳定的温度范围为5-60℃，最适稳定温度为25-35℃。同时，酶在Cu2+浓度为1mmol/L时活力损失显著，Zn2+和Fe2+也有一定影响，对羔羊皱胃酶的活力也有不同程度的抑制或激活作用。
2.亲和力
羔羊皱胃酶对试题分子的亲和力较大，Km值较小，故羊皱胃酶对大分子底物的分解能力较强。
3.酸碱热效应
在制备羊皱胃酶的过程中，应用所提纯酶发生了较大的酸碱热效应变化，其中酸泵碱峰最高，热峰在pH5.0左右，表明羔羊皱胃酶的桥头引入以弱酸性和弱碱性物质为主。
四、结论
本文采用硫酸铵饱和度调节法制备得到了纯度达到90%以上的羔羊皱胃酶，并在该酶的部分性质研究中，发现该酶在pH2.0-9.0范围内较为稳定，稳定的温度范围为5-60℃，最适稳定温度为25-35℃。同时，羊皱胃酶对大分子底物的分解能力较强，且对试题分子的亲和力较大。这些结果对羔羊皱胃酶的应用具有十分重要的参考价值。