PTLC和柱色谱精讲.pptx

浅谈（硅胶）制备型薄层色谱与（硅胶）柱色谱的操作问题一般我们实验中应用最多的是以硅胶吸附剂为固定相的薄层色谱和柱色谱。虽然很多化学实验书中都叙述了（硅胶）制备型薄层色谱与（硅胶）柱色谱的操作技术的实验方法但大多数都是比较雷同地泛泛地描述而且有些描述在实验室中并不适用。例如很多书中都提到装柱时先在底层铺一层石英砂加入固定相后再在顶部铺一层石英砂。比较繁琐而且效果“？”在实验室中不适用。吸附色谱的原理：吸附色谱是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附极性较弱的物质不易被硅胶吸附整个过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。第一部分（硅胶）制备型薄层色谱(PTLC)一、制板操作二、点样操作三、回收分离组分四、常见问题及注意事项第二部分（硅胶）柱色谱的操作问题一、装柱二、上样三、洗脱剂的使用四、洗脱的技巧第一部分（硅胶）制备型薄层色谱(PTLC)（2）物理和化学性质：纤维素羧甲基醚的钠盐为白色或乳白色纤维状粉末或颗粒几乎无味具吸湿性。易于分散在水中成透明胶状溶液在乙醇等有机溶剂中不溶。1%水溶液pH为6.5～8.5当pH>10或<5时胶浆粘度显著降低在pH=7时性能最佳。对热稳定在20℃以下粘度迅速上升45℃时变化较慢80℃以上长时间加热可使其胶体变性而粘度和性能明显下降。在碱性溶液中很稳定遇酸则易水解pH值为2-3时会出现沉淀遇多价金属盐也会反应出现沉淀。作用是做粘合剂。其他粘合剂：煅石膏、淀粉等。0.5%CMC-Na溶液制备过程：例如取蒸馏水1000ml加热煮沸♣将羧甲基纤维素钠5g分次撒入沸水中玻璃棒搅拌直到完全溶解。煮沸前加少量水补蒸发量。为何分次加入CMC-Na？2.硅胶粘合取一定量硅胶放入研钵中加入3倍量的0.5%CMC-Na溶液向同一方向研磨至无气泡粘液成线状即可。为什么要同一方向？3.铺板适宜的薄层吸附剂的厚度为0.5-2mm板的尺寸一般为20cm×20cm大约需要硅胶的量为30克（经验值）所以PTLC常用来分离毫克级的样品。二、点样操作三、回收分离组分PTLC展开结束后有紫外吸收的化合物可以在紫外灯下确认色带位置；无紫外吸收的化合物可采用在板上面覆盖一块玻璃板然后在板的边缘喷洒显色剂来确认色带的位置。确定各组分色带的位置后用刮刀将该色带从板上刮下然后用极性尽量低（极性越高往往被提出的杂质的量就越大）、对该化合物溶解度好的溶剂洗脱过滤除去吸附剂收集洗脱液回收溶剂即可。甲醇可溶解硅胶及其中含有的一些杂质因此并不适合用来洗脱较合适的溶剂是丙酮、乙醇或氯仿。四、常见问题及注意事项3.玻璃板清洁问题：可以先用洗手液或洗衣粉清洗再用自来水冲洗干净接着用蘸有乙醇的棉花擦拭干净最后把板吹干或烘干放置于清洁处备用。玻璃板应该很干净没有划痕没有缺口4个角要“健全”。4.平衡与饱和问题：展开前薄层板置于盛有展开剂的展开缸中饱和15～30分钟此时薄板不与展开剂接触。饱和可以增加展开剂的散发面积减少边缘效应。5.显色的问题：（1）物理显色：紫外灯下观察常用波长254nm或365nm。（2）化学显色：通用型显色剂：碘蒸气对许多有机化合物都可以显色如生物碱、AA衍生物、肽类、脂类、皂苷类等该显色反应是可逆反应在空气中随着碘的升华挥发组分斑点可恢复到原来状态。10%硫酸乙醇溶液使大多数有机化合物产生有色斑点例如棕色甚至于出现荧光。0.05%荧光黄甲醇溶液是芳香族与杂环化合物的通用显色剂。专属性显色剂第二部分（硅胶）柱色谱的操作问题解决方法很简单：将称取的干硅胶直接倒入所选柱子中敲实观察硅胶在柱子中的高度这样就可以做到心中有数了。一般在装柱的时候可以根据实验所需柱子的高度来调整硅胶的使用量这样就可以大大地节省硅胶的使用避免造成没有必要的浪费。柱色谱的装柱非常重要装柱的效果会直接影响层析分离效果。有湿法装柱和干法装柱等两种方法。湿法装柱很简单使用也最普