一种液质联用法检测禽畜组织中多种抗生素残留的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112326815A(43)申请公布日2021.02.05(21)申请号202011107354.8(22)申请日2020.10.16(71)申请人丽珠集团新北江制药股份有限公司地址511518广东省清远市人民一路(72)发明人陈倩倩李想唐阳刚张勇王珂(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205代理人谭英强(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/14(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图2页(54)发明名称一种液质联用法检测禽畜组织中多种抗生素残留的方法(57)摘要本发明公开了一种液质联用法检测禽畜组织中多种抗生素残留的方法，该方法包含样品的前处理和液质联用含量测定两部分。检测的抗生素主要是市面上常用的驱虫类兽药包括多拉菌素、赛拉菌素、莫西克丁以及米尔贝肟。其中前处理的主要操作步骤是：取除毛的皮下肉组织，匀浆机打碎成泥状备用。用提取试剂超声波提取后用自制固相萃取小柱富集。前处理方法能有效除去蛋白等杂质，且方法简便、环保。液质联用采用SRM模式检测，分析方法灵敏度高、检测快。CN112326815ACN112326815A权利要求书1/1页1.一种测定禽畜组织残留抗生素的液质联用方法，包括样品前处理和液质联用，其特征在于，所述样品前处理包括以下步骤：1)剪碎禽畜的皮下无骨肉并匀浆处理；2)匀浆的组织中加入提取试剂，超声波，离心过滤收集上清液；所述提取试剂由乙腈、乙醇或丙酮的一种与三氟乙酸组成；3)将稀释上清液经过固相萃取小柱洗脱得待测液，待色谱分析；其中，所述液质联用的流动相A是乙腈，流动相B是甲酸水溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)提取试剂由乙腈、乙醇、丙酮中的一种与三氟乙酸按照体积比2～5:1组成；优选的，由乙腈与三氟乙酸按照体积比2:1组成。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)提取试剂的加入量为匀浆组织5-10倍。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)超声波提取的时间为20-25min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所用的固相萃取小柱为8-10um粒径的C18填料，装柱体积为1/10-1/15滤液。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述洗脱液体为乙腈、乙醇或者丙酮的至少一种，优选的是乙腈；洗脱体积为1-2个柱体积。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液质联用的液相条件为：流动相A乙腈与流动相B0.1％甲酸水溶液的体积比为5～6:1；流速:0.2～0.4mL/min；分析时间:10-12min；进样量:5-10ul；色谱柱为WatersXbridgeC18，1.7um，100*2.1mm，以0.3-0.5mL/min流速洗脱。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液质联用的质谱条件为：检测模式：正离子SRM检测模式；鞘气：20-40arb；辅气：8-12arb；离子源温度：300-400℃；反吹气：0-2arb；毛细管温度：350-380℃；喷雾电压：3500-4500KV。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液质联用化合物测量参数：化合物母离子m/z子离子m/z碰撞电压eV多拉菌素921.4777.625赛拉菌素770.21626.2028莫西克丁640.16528.3125米尔贝肟554.67536.6726。2CN112326815A说明书1/7页一种液质联用法检测禽畜组织中多种抗生素残留的方法技术领域[0001]本发明属于残留药物的高效液相色谱串联质谱仪分析领域，具体涉及一种测定禽畜组织中多种抗生素残留的液质联用方法。背景技术[0002]多拉菌素(Doramectin)、赛拉菌素(Selamectin)、莫西克丁(Moxidectin)以及米尔贝肟(MelbemycinOxime)是常用的兽用抗生素。单用或者相比于传统抗生素，这些抗生素抗虫谱广，无论对于三纲12目73属的寄生虫，亦或是禽畜体内外的寄生虫均有效。兽用抗生素经人体吸收后会经过血液循环传递到人体组织内，长期使用会形成抗生素耐受或者肝肾毒害，尤其是孕妇或者哺乳期妇女，食用兽用抗生素超标的药物后会造成胎儿或者婴幼儿致畸、大脑发育不良等严重危害。因此建立一种测定禽畜组织中新型兽药类抗生素残留的方法具有重要意义。[0003]现有技术中，禽畜动物组织残留药物的提取主要有两方面的难点，一是提取是否彻底完全；二是样品的富集和浓缩。如何选择能充分提取目标化合物的提取试剂，选择提取方法，除去蛋白等干扰物，富集产物并且选择专属性、灵敏度高的检测方法是食物来源药物残