一种乳酸残留量的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112326839A(43)申请公布日2021.02.05(21)申请号202011278713.6(22)申请日2020.11.16(71)申请人山东华熙海御生物医药有限公司地址250104山东省济南市高新区世纪大道中段3333号(72)发明人陈玉娟陈雯雯万金玉邵萌栾贻宏郭学平(74)专利代理机构北京唐颂永信知识产权代理有限公司11755代理人刘伟(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/60(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图1页(54)发明名称一种乳酸残留量的检测方法(57)摘要本申请提供一种乳酸残留量的检测方法，包括：利用无水乙醇提取待测样品中的乳酸，制备待测溶液；使用高效液相色谱对待测溶液进行检测；基于检测结果计算所述待测样品中乳酸的残留量。本申请的方法中的色谱柱的柱效高，耐用性好，且流动相中不需要添加有机相，能够有效地检测透明质酸中的乳酸残留。CN112326839ACN112326839A权利要求书1/1页1.一种乳酸残留量的检测方法，其特征在于，包括：利用无水乙醇提取待测样品中的乳酸，制备待测溶液；使用高效液相色谱对待测溶液进行检测；基于检测结果计算所述待测样品中乳酸的残留量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品中包含有透明质酸。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，向每10g所述待测样品中加入40～100ml的所述无水乙醇。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，将所述待测样品加入到所述无水乙醇中，混合均匀，形成混合溶液，然后将混合溶液密封，并进行超声处理，之后将混合溶液转移到容量瓶中，并用无水乙醇定容，然后取上清液挥干，得到固体混合物，之后用弱酸溶液溶解所述固体混合物，并定容，然后过滤，得到的滤液为待测溶液。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述超声处理时间为15～40min。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述弱酸溶液为磷酸溶液，所述磷酸溶液的浓度为0.5wt％～1.2wt％。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱为阳离子交换色谱柱。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述阳离子交换色谱柱为磺化交联的苯乙烯二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子H+型交换色谱柱。9.根据权利要求7-8任一项所述的方法，其特征在于，所述阳离子交换色谱柱为MCIGELCK08EH色谱柱。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的流动相为弱酸溶液。2CN112326839A说明书1/10页一种乳酸残留量的检测方法技术领域[0001]本申请涉及透明质酸的检测领域，且更为具体地涉及一种乳酸残留的检测方法。背景技术[0002]透明质酸(Hyaluronicacid，简称HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖(1-4)-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。1934年由Meyer等人从牛玻璃球眼中首次提取获得。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，由于HA具有良好的保湿性、粘弹性、渗透性和延展性，同时无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品、医药和临床治疗等行业领域。[0003]HA最初是从鸡冠、眼球等动物组织中提取的，由于这些原料来源有限，且成本高，用提取法生产已不能满足日益增加的HA在医药和化妆品生产方面的需要。为了扩大生产规模，降低生产成本，发酵法生产HA的工艺迅速发展起来。HA发酵使用的菌种为链球菌，其在发酵过程中产生小分子有机酸的总量远大于HA。在现有生产工艺条件下，发酵液中HA的产量达到6～10g/L，而乳酸的含量则为30～40g/L。发酵结束后，一般使用乙醇将HA沉淀并进一步纯化，乳酸做为发酵液中含量最高的有机酸，对成品HA中的乳酸残留量进行检测可反映纯化工艺效果及产品杂质控制程度。[0004]目前，小分子有机酸的检测分析一般采用RP-C18色谱柱，流动相以pH为2～3的甲醇/乙腈-稀酸溶液为主，色谱填料长期在低pH环境下使用易造成键合相的水解，导致柱效不断下降。发明内容[0005]为了解决上述问题，本申请的申请人在日常分析工作中偶然发现一种阳离子交换色谱柱，在较高柱温下对乳酸的分析效果好，柱效高，且耐用性强，流动相中不需要添加有机相，由此建立了上述方法，用于透明质酸相关产品中乳酸残留的检测。[0006]为