体外环境中细胞捕获及检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112626172A(43)申请公布日2021.04.09(21)申请号201910955910.8(22)申请日2019.10.09(71)申请人德路通（石家庄）生物科技有限公司地址050000河北省石家庄市高新区黄河大道136号2号楼7层(72)发明人许宝芝王卿卿(74)专利代理机构石家庄旭昌知识产权代理事务所(特殊普通合伙)13126代理人张会强(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)G01N1/40(2006.01)G01N33/68(2006.01)G01N33/58(2006.01)权利要求书1页说明书10页(54)发明名称体外环境中细胞捕获及检测方法(57)摘要本发明提供了一种体外环境中细胞的捕获及检测方法，其中的细胞捕获方法包括对血液进行处理后细胞采集，还包括对血液外的其它体液或混合有体液的混合液体多次离心，留下最终获得的沉淀物，向最终获得的沉淀物中加入完全培养液，混合均匀得到沉淀悬浮液，再将采样器的采集区浸泡于悬浮液中捕获细胞。本发明可通过采样器的细胞采集区在体外环境中对细胞进行捕获。CN112626172ACN112626172A权利要求书1/1页1.一种体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：该细胞捕获方法用于在体外环境中对体液或混合有体液的混合液体中的细胞进行捕集，且：s1.若所述体液为血液，所述细胞捕获方法包括对血液进行抗凝处理，将具有细胞采集区的采样器的采集区浸泡于血液中进行细胞捕集，或者，血液进行红细胞裂解去除红细胞，再去除白细胞，并将具有细胞采集区的采样器的采集区浸泡于血液中进行细胞捕集；s2.若所述体液不为血液，或者进行细胞捕集的是混合有体液的混合液体，所述细胞捕获方法包括：步骤s21.离心所述体液并获得沉淀物；步骤s22.向步骤s21最终获得的沉淀物中加入完全培养液，混合均匀得到沉淀悬浮液；步骤s23.将具有细胞采集区的采样器的采集区浸泡于步骤s22的悬浮液中，并整体放置于摇床上于恒温环境下进行吸附，以由所述采集区捕集细胞。2.根据权利要求1所述的体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：步骤s21包括：步骤s211.取一部分体液或混合液体室温离心；步骤s212.离心后去除上清液，留下沉淀物；步骤s213.再取一部分体液与步骤s212中的沉淀物混合，室温离心；步骤s214.重复步骤s212和步骤s213，直至所有体液离心完成；步骤s215.在步骤s214中最后一次离心后，去除上清液，留下最终获得的沉淀物。3.根据权利要求2所述的体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：s2中，各离心步骤与吸附步骤均在低吸附离心管中进行。4.根据权利要求2所述的体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：在进行步骤s23之前，还包括对步骤s22的悬浮液进行吹打混均的处理步骤。5.根据权利要求2所述的体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：步骤s211与步骤s213中采用水平离心机进行离心，步骤s23中整体放置于立体摇床上进行吸附。6.根据权利要求5所述的体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：步骤s23中每吸附设定阈值时间，将采样器翻转一次。7.根据权利要求1至6任一项所述的体外环境中细胞捕获方法，其特征在于：s2中还包括：步骤s24.吸附完成后，将采样器的采集区置于预冷的固定溶液的进行细胞固定。8.一种细胞检测方法，其特征在于：该检测方法用于对权利要求1至7任一项所述的体外环境中细胞捕获方法所捕获的细胞进行检测，且所述检测方法至少包括通过对捕获的细胞进行免疫荧光染色以进行细胞蛋白的检测，以及提取捕获细胞的DNA并进行全基因组扩增，以进行包括但不限于数字PCR、荧光定量PCR和基因二代测序的基因检测。2CN112626172A说明书1/10页体外环境中细胞捕获及检测方法技术领域[0001]本发明涉及细胞捕获及检测技术领域，特别涉及一种体外环境中细胞捕获方法，同时本发明也涉及所捕获的细胞的检测方法。背景技术[0002]病理或分子生物学诊断中，出于病因判断或进行病理培养等的需要，经常要对人体细胞进行采集，以进行后续相关的检测处理。目前，在人体细胞的采集上，一般有体内采集与体外采集两种形式，且体内采集中较多的例如为对人体循环血液内的细胞进行捕获采集。不过体内采集的方式由于是直接在人体上进行相关操作，仍存在有诸多实施上的不便，因而尝试在体外环境中利用人体所排出的体液进行细胞的捕获采集便成为一种较好的替换方式，但目前体外环境中捕获细胞的方法大都步骤繁多、需要进行多次细胞处理、处理时间长，容易对细胞造成损害。发明内容[0003]有鉴于此，本发明旨在提出一种简单易行、且耗时短的体外环境中细胞捕获方法，以能够在体外环境中进行细胞的捕获采集，同时保持细胞的完整性