一种蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112707966A(43)申请公布日2021.04.27(21)申请号202011502217.4(22)申请日2020.12.18(71)申请人华南理工大学地址511458广东省广州市南沙区环市大道南路25号华工大广州产研院(72)发明人娄文勇吴晓玲熊隽宗敏华(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245代理人苏运贞(51)Int.Cl.C07K17/02(2006.01)C12N11/02(2006.01)权利要求书2页说明书14页附图5页(54)发明名称一种蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物及其制备方法与应用，属于生物材料制备技术领域。本发明将蛋白质、锌离子、核苷酸来源的化合物在溶液条件下自组装形成蛋白质‑金属核苷酸复合物。将上述得到的物质分散到有机配体溶液，随着有机配体不断取代原有核苷酸的位置，形成杂化配位结构，获得多级孔道金属有机骨架复合物。本发明所提供的蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物的制备方法操作简便，反应条件温和，稳定性好，蛋白的生物活性得到较大程度保留。本发明所制备的蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物，显著提高了蛋白的生物活性，提升了其在实际使用环境中的稳定性，拓展了其应用范围。CN112707966ACN112707966A权利要求书1/2页1.一种蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：(1)将核苷酸来源的化合物和蛋白质加入到溶剂中混合均匀，得到含核苷酸来源的化合物和蛋白质的混合液；(2)向步骤(1)的含核苷酸来源的化合物和蛋白质的混合液中加入锌盐溶液，搅拌反应，获得含有沉淀的反应液；(3)将步骤(2)的含有沉淀的反应液离心，取沉淀，洗涤，加入分散剂分散，得到分散液；(4)向步骤(3)中得到的分散液中加入有机配体溶液，搅拌反应，获得含有沉淀颗粒的反应溶液；(5)将步骤(4)的含有沉淀颗粒的反应溶液取出，离心取沉淀颗粒物，洗涤，干燥，所得粉末即为蛋白质与多级孔道金属有机骨架复合物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的核苷酸来源的化合物包括但不限于核苷酸和核苷酸盐中的至少一种；所述的核苷酸包括但不限于单磷酸腺苷、单磷酸鸟苷、单磷酸胞苷、单磷酸尿苷、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷、二磷酸胞苷、三磷酸鸟苷、单磷酸脱氧腺苷、单磷酸脱氧鸟苷、二磷酸脱氧腺苷和单磷酸脱氧胞苷中的至少一种；所述的核苷酸盐包括但不限于单磷酸腺苷二钠盐、单磷酸鸟苷二钠盐、单磷酸胞苷二钠盐、单磷酸尿苷二钠盐、二磷酸腺苷二钠盐、单磷酸脱氧腺苷二钠盐、单磷酸脱氧鸟苷二钠盐、单磷酸脱氧胞苷二钠盐、单磷酸腺苷单钠盐、单磷酸鸟苷单钠盐、单磷酸腺苷二钾盐、单磷酸脱氧腺苷二钾盐和单磷酸鸟苷二钾盐中的至少一种；所述的核苷酸来源的化合物进一步为单磷酸腺苷、单磷酸腺苷二钠盐、单磷酸鸟苷二钠盐、二磷酸脱氧腺苷、单磷酸脱氧腺苷二钾盐和单磷酸胞苷二钠盐中的至少一种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的蛋白质包括但不限于酶、绿色荧光蛋白、免疫球蛋白和抗体中的至少一种；所述的酶包括但不限于细胞色素c、细胞色素P450、辣根过氧化物酶、乙醇脱氢酶、脂肪酶、乙酰胆碱酯酶、漆酶、酪氨酸酶、葡萄糖脱氢酶、葡萄糖氧化酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、碳酸酐酶、醛酮还原酶、淀粉酶、蔗糖酶、超氧化物歧化酶、脲酶和过氧化氢酶中的至少一种；所述的脂肪酶为猪胰脂肪酶和南极假丝酵母脂肪酶B中的至少一种；所述的免疫球蛋白为血清免疫球蛋白G；所述的蛋白质进一步为葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶、蔗糖酶、猪胰脂肪酶、酪氨酸酶、南极假丝酵母脂肪酶B、细胞色素c和血清免疫球蛋白G中的至少一种。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的蛋白质的分子量为5～1000kDa；步骤(1)中所述的核苷酸来源的化合物与蛋白质按摩尔比1～100000:1～10000计算；步骤(1)中所述的溶剂为水、缓冲液、二甲基亚砜、叔丁醇、叔戊醇、乙腈、丙酮、甲醇、乙醇和正己烷中的至少一种。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的锌盐为可溶性锌盐；所述的可溶性锌盐包括但不限于乙酸锌、氯化锌、硫酸锌和水合硝酸锌中的至少一种；2CN112707966A权利要求书2/2页步骤(2)中所述的锌盐溶液的溶剂为水、缓冲液、二甲基亚砜、叔丁醇、叔戊醇、乙腈、丙酮、甲醇、乙醇和正己烷中的至少一种；步骤(2)中所述的锌盐溶液中的锌离子浓度为1～1000mM；步骤(2)中所述的蛋白质与锌盐溶液中的锌离子的质量比按0.00001～4:1计算；步骤(2)中所述的搅