一种用于诊断消化系统肿瘤的分子标志物及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114150060A(43)申请公布日2022.03.08(21)申请号202111207911.8(22)申请日2021.10.18(71)申请人中国人民解放军总医院第一医学中心地址100853北京市海淀区复兴路28号(72)发明人郭明洲张美英姚远新苏小茉吕红慧李媛(74)专利代理机构北京正理专利代理有限公司11257代理人赵晓丹(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图1页(54)发明名称一种用于诊断消化系统肿瘤的分子标志物及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于诊断消化系统肿瘤的分子标志物及试剂盒，尤其是L3MBTL4基因启动子区DNA甲基化作为分子标志物在制备诊断消化系统肿瘤产品中的应用。本发明首次通过MSP的方法在胰腺癌、肝癌、胃癌和食管癌中发现L3MBTL4启动子区频繁发生高甲基化，并发现L3MBTL4参与DNA损伤修复的NHEJ通路，L3MBTL4甲基化是CHK1抑制剂结合顺铂等化疗药物杀伤肿瘤细胞的协同致死标志物。本发明还提供了用于检测L3MBTL4基因启动子区甲基化状态的引物、试剂盒。应用本发明引物、试剂盒来检测L3MBTL4基因启动子区高甲基化状态可作为胰腺癌、肝癌、胃癌和食管癌诊断、疗效观察、预后判断、微小残留病检测等的有力手段，而且，操作简便、稳定性好，具有深远的临床意义和推广性。CN114150060ACN114150060A权利要求书1/1页1.L3MBTL4基因启动子区DNA片段作为分子标志物在制备诊断消化系统肿瘤产品中的应用，其特征在于，所述消化系统肿瘤为胰腺癌、肝癌、胃癌或食管癌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述L3MBTL4基因启动子区DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，且包含至少一个甲基化位点。3.检测L3MBTL4基因启动子区DNA片段甲基化状态的物质在制备诊断消化系统肿瘤产品中的应用，其特征在于，所述消化系统肿瘤为胰腺癌、肝癌、胃癌或食管癌。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述L3MBTL4基因启动子区DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，且包含至少一个甲基化位点。5.一种诊断消化系统肿瘤的试剂盒，其特征在于：包括用于检测L3MBTL4基因启动子区甲基化状态的物质，所述消化系统肿瘤为胰腺癌、肝癌、胃癌或食管癌。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于检测L3MBTL4基因启动子区甲基化状态的物质针对L3MBTL4基因启动子区核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的DNA序列。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述物质包括甲基化引物对和非甲基化引物对；优选的，所述甲基化引物对的上游引物核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；所述非甲基化引物对的上游引物核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNo.5所示。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括甲基化阳性对照PCR模板和非甲基化阳性对照PCR模板。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述甲基化阳性对照PCR模板为硫化修饰后的L3MBTL4基因启动子区100％甲基化的肿瘤细胞DNA；所述非甲基化阳性对照PCR模板为硫化修饰后的L3MBTL4基因启动子区100％非甲基化的正常淋巴细胞或正常组织细胞DNA。10.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括MS‑PCR反应所需试剂。2CN114150060A说明书1/7页一种用于诊断消化系统肿瘤的分子标志物及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域。更具体地，涉及一种用于诊断消化系统肿瘤的分子标志物及试剂盒。背景技术[0002]胰腺癌是一种恶性程度很高的消化道恶性肿瘤，5年生存率不到10％，被称为“癌中之王”。近年来，胰腺癌发病率和死亡率呈持续上升趋势，预计到2030年将成为全球第二位的致死性肿瘤。中国国家癌症中心2017年数据显示，胰腺癌居我国男性恶性肿瘤发病率的第7位，女性第11位，位于恶性肿瘤相关死亡率的第6位。胰腺癌起病隐匿，早期症状不典型，就诊时多已进展至晚期，多数已失去手术机会。对于可切除的胰腺癌患者，术后复发风险也较高，部分患者术后早期即出现局部复发或远处转移。国内数据显示2016‑2019年期间3279例胰腺癌切除术后患者，9个月内复发率为45.87％(赵玉沛,中国胰腺癌诊治指南(2021).中国实用外科杂志,2021.7)。Groot等分析957例胰腺癌术后患者，51.5％的患者在术后一年内出现局部