一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114150061A(43)申请公布日2022.03.08(21)申请号202111207914.1(22)申请日2021.10.18(71)申请人中国人民解放军总医院第一医学中心地址100853北京市海淀区复兴路28号(72)发明人郭明洲张美英吕红慧苏小茉姚远新于咏(74)专利代理机构北京正理专利代理有限公司11257代理人赵晓丹(51)Int.Cl.C12Q1/6886(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图1页(54)发明名称一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒，尤其是BEND4基因启动子区DNA甲基化作为分子标志物在制备诊断癌症产品中的应用。本发明首次通过MSP的方法在胰腺癌、乳腺癌和食管癌中发现BEND4启动子区频繁发生高甲基化，并发现BEND4参与DNA损伤修复的NHEJ通路，BEND4甲基化是ATM抑制剂结合顺铂等化疗药物杀伤肿瘤细胞的协同致死标志物。本发明还提供了用于检测BEND4基因启动子区甲基化状态的引物、试剂盒。应用本发明引物、试剂盒来检测BEND4基因启动子区高甲基化状态可作为胰腺癌、乳腺癌和食管癌诊断、疗效观察、预后判断、微小残留病检测等的有力手段，而且，操作简便、稳定性好，具有深远的临床意义和推广性。CN114150061ACN114150061A权利要求书1/1页1.BEND4基因启动子区DNA片段作为分子标志物在制备诊断癌症产品中的应用，其特征在于，所述癌症为胰腺癌、食管癌或乳腺癌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述BEND4基因启动子区DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，且包含至少一个甲基化位点。3.检测BEND4基因启动子区DNA片段甲基化状态的物质在制备诊断癌症产品中的应用，其特征在于，所述癌症为胰腺癌、食管癌或乳腺癌。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述BEND4基因启动子区DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，且包含至少一个甲基化位点。5.一种诊断癌症的试剂盒，其特征在于：包括用于检测BEND4基因启动子区甲基化状态的物质，所述癌症为胰腺癌、食管癌或乳腺癌。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于检测BEND4基因启动子区甲基化状态的物质针对BEND4基因启动子区核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的DNA序列。7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述物质包括甲基化引物对和非甲基化引物对；优选的，所述甲基化引物对的上游引物核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；所述非甲基化引物对的上游引物核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，下游引物核苷酸序列如SEQIDNo.5所示。8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括甲基化阳性对照PCR模板和非甲基化阳性对照PCR模板。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述甲基化阳性对照PCR模板为硫化修饰后的BEND4基因启动子区100％甲基化的肿瘤细胞DNA；所述非甲基化阳性对照PCR模板为硫化修饰后的BEND4基因启动子区100％非甲基化的正常淋巴细胞或正常组织细胞DNA。10.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括MS‑PCR反应所需试剂。2CN114150061A说明书1/7页一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域。更具体地，涉及一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒。背景技术[0002]胰腺癌(pancreaticcancer,PC)是最难治的癌症之一，被认为在消化系统肿瘤中预后最差。尽管采用不同的手术治疗方案和辅助治疗以及新辅助化疗来治疗PC，但总体5年生存率仍不超过8％(BrayF,FerlayJ.Globalcancerstatistics2018:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries.CACancerJClin.2018Nov；68(6):394‑424.；SiegelRL,MillerKD.CACancerJClin.2017Jan；67(1):7‑30.)。PC患者的高死亡率主要归因于其早期缺乏典型症状和侵袭性局部侵袭。PDAC(pancreaticductaladenocarcinoma,PDAC)是迄今为止最常见的类型，占原发性胰腺癌的85％以上，因此“胰腺癌”的大多数属性都与这种肿瘤类型有关。PDACs在头部明显比胰腺的其余部分更常见。绝大多数是实体