一种分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114181911A(43)申请公布日2022.03.15(21)申请号202111633543.3(51)Int.Cl.(22)申请日2021.12.28C12N5/20(2006.01)C07K16/44(2006.01)(83)生物保藏信息G01N33/577(2006.01)CGMCCNo.223412021.05.13(71)申请人江南大学地址214122江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号(72)发明人胥传来王鹏匡华徐丽广孙茂忠吴晓玲刘丽强马伟朱建平郝昌龙宋珊珊胡拥明吴爱红郭玲玲胥欣欣(74)专利代理机构苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)32257代理人王玉仙权利要求书2页说明书11页附图1页(54)发明名称一种分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用(57)摘要本发明涉及一种分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为单克隆细胞株PRM，于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.22341。本发明的杂交瘤细胞株可以高效且稳定地分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体，为动物源食品与化妆品中螺内酯及其代谢物残留量的检测提供有力的检测方法与手段，具有较好的灵敏度和特异性。CN114181911ACN114181911A权利要求书1/2页1.一种分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株命名为单克隆细胞株PRM，于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.22341。2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株由以下步骤制备得到：S1：将螺内酯及其代谢物免疫原制备成弗氏佐剂，注射入免疫动物体内；首次免疫采用完全弗氏佐剂，加强免疫采用不完全弗氏佐剂，冲刺免疫采用螺内酯及其代谢物免疫原；其中，所述螺内酯及其代谢物免疫原由坎利酮半抗原制备得到，所述坎利酮半抗原的结构如式I所示；S2：对经过上述免疫过程的免疫动物进行采血，检测免疫动物的血清免疫效价和免疫抑制能力，筛选出血清中螺内酯及其代谢物抗体含量高的免疫动物；S3：将步骤S2中筛选得到的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞融合并进行培养，检测阳性细胞孔并测定抑制效果，对有最好抑制效果的阳性细胞孔进行亚克隆，得到所述分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株；3.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述螺内酯及其代谢物免疫原由所述坎利酮半抗原活化后与牛血清蛋白偶联得到。4.一种螺内酯及其代谢物单克隆抗体，其特征在于：所述螺内酯及其代谢物单克隆抗体由权利要求1‑3任一项所述的杂交瘤细胞株分泌得到。5.权利要求1‑3任一项所述的杂交瘤细胞株或权利要求4所述的螺内酯及其代谢物单克隆抗体在检测螺内酯及其代谢物中的应用。6.根据权利要求5所述的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述代谢物选自坎利酮、睾酮、孕酮、宝丹酮、丙酸睾丸素、去氢雄酮、双氟米松和氢化可的松中的至少一种。7.一种螺内酯及其代谢物检测试剂盒，其特征在于：所述螺内酯及其代谢物检测试剂盒包括权利要求1‑3任一项所述的杂交瘤细胞株或权利要求4所述的螺内酯及其代谢物单克隆抗体。8.根据权利要求7所述的螺内酯及其代谢物检测试剂盒，其特征在于：所述螺内酯及其代谢物检测试剂盒中还包括螺内酯及其代谢物包被原。9.根据权利要求8所述的螺内酯及其代谢物检测试剂盒，其特征在于：所述螺内酯及其2CN114181911A权利要求书2/2页代谢物包被原由螺内酯半抗原活化后与鸡卵白蛋白偶联得到。10.根据权利要求9所述的螺内酯及其代谢物检测试剂盒，其特征在于，所述螺内酯半抗原的结构如式II所示：3CN114181911A说明书1/11页一种分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用技术领域[0001]本发明涉及免疫检测技术领域，尤其涉及一种分泌螺内酯及其代谢物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。背景技术[0002]螺内酯又名安体舒通，是由美国辉瑞公司研发的盐皮质类固醇拮抗剂。螺内酯化学结构与醛固酮相似，是临床最早使用的醛固酮受体拮抗药，可竞争性的与胞浆中的醛固酮受体结合，拮抗醛固酮的排钾保钠作用，促进水的排出，减少K+的分泌。由于此药利尿作用与体内醛固酮水平有关，属于保钾利尿药。临床在高血压的治疗中常与咪嗦类利尿药联合应用预防低血钾。螺内酯在人体内血药浓度低，代谢速度快，进入体内后由肝脏代谢为坎利酮。目前，利尿剂会被当成兽药添加到饲料，用于治疗牛乳房炎，或者改善禽蛋蛋白比例等。但一些不法分子会用利尿剂