Rv2779c基因及其表达产物作为抗结核分枝杆菌靶点的应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114438106A(43)申请公布日2022.05.06(21)申请号202210132724.6C12Q1/6883(2018.01)(22)申请日2022.02.14A61K31/496(2006.01)A61K31/7036(2006.01)(71)申请人首都医科大学附属北京胸科医院A61K39/04(2006.01)地址101149北京市通州区北关大街9号院A61K45/00(2006.01)申请人北京市结核病胸部肿瘤研究所A61P31/06(2006.01)(72)发明人陈素婷黄海荣滕田璐郑继芳C12R1/32(2006.01)尚园园鲍生娟(74)专利代理机构北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)11463专利代理师王闯(51)Int.Cl.C12N15/31(2006.01)C12N15/90(2006.01)C12N15/74(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表4页附图3页(54)发明名称Rv2779c基因及其表达产物作为抗结核分枝杆菌靶点的应用(57)摘要本发明公开了Rv2779c基因及其表达产物作为抗结核分枝杆菌靶点的应用，涉及生物医药技术领域。本发明首次发现，Rv2779c基因的敲除突变极大降低了结核分枝杆菌在药物(如利福平或链霉素)压力下的持留生长，同时降低了结核分枝杆菌在感染小鼠体内的存活率。因此，可将Rv2779c基因作为作用靶点用于筛选或制备抗结核分枝杆菌(尤其是抗耐药性结核分枝杆菌)的药物，Rv2779c基因可作为潜在的抗结核药物新靶点。CN114438106ACN114438106A权利要求书1/1页1.Rv2779c基因及其表达产物作为抗结核分枝杆菌靶点的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括以Rv2779c基因及其表达产物为作用靶点制备或筛选抗结核分枝杆菌的药物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括通过基因工程方法敲除或者敲减Rv2779c基因；优选地，所述基因工程方法包括同源重组方法。4.根据权利要求3所述的应用，所述同源重组方法包括：(a)针对结核分枝杆菌的Rv2779c基因上下游及内侧的左右翼同源重组臂扩增引物对以H37Rv的基因组DNA为模板，扩增同源重组臂；(b)将重组臂构建到AE159穿梭质粒中，利用温度敏感性噬菌体介导将同源重组质粒导入H37Rv中；(c)使用重组元件中潮霉素抗性标记进行阳性重组克隆的筛选，获得Rv2779c基因的缺失突变体菌株Lrp‑KO。5.Rv2779c基因的抑制剂在制备抗结核分枝杆菌的产品中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制剂包括抑制Rv2779c基因表达的试剂和/或使Rv2779c蛋白活性降低或失活的试剂。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用为Rv2779c基因的抑制剂在降低结核分枝杆菌在药物压力条件下持留生长中的应用，所述药物包括利福平或链霉素。8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用为Rv2779c基因的抑制剂在降低结核分枝杆菌感染小鼠的体内的存活率中的应用。9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括获得所述Rv2779c基因的敲除突变株，被敲除序列为如SEQIDNo.1所示的Rv2779c基因序列的部分或全部。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述Rv2779c基因的敲除突变株用于制备结核分枝杆菌减毒疫苗。2CN114438106A说明书1/6页Rv2779c基因及其表达产物作为抗结核分枝杆菌靶点的应用技术领域[0001]本发明涉及生物医药技术领域，尤其是涉及Rv2779c基因及其表达产物作为抗结核分枝杆菌靶点的应用。背景技术[0002]结核病是一种非常古老的传染病，也是目前依然危害人类健康的重大传染性疾病之一。尽管在上个世纪四、五十年代，链霉素等抗生素的发现为结核病的治疗提供了有效手段，但近年来随着耐药结核病的发生，耐药结核病形式日趋严重，抗结核新药靶点的开发是防治耐药结核病的可靠保证。[0003]目前对于结核病抗药靶点开发主要集中在核糖体代谢或能量代谢的相关基因，但对于单基因的药物靶点可能更容易发生耐药。转录调控因子可以操纵细菌基因组中多个基因的转录表达，认为其更具有抗结核新药靶点开发的潜在价值。[0004]Rv2779c基因是可能的结核分枝杆菌的亮氨酸应答调节蛋白/天冬酰胺合成酶C家族转录调控因子(亦被称为饥饿筵席调节蛋白)的编码基因，该家族蛋白或广泛(Lrp)或特异性(AsnC)地参与了多种细胞代谢过程的调控，诸如：氨基酸代谢、菌毛的合成、DNA修复和重组。既往研究发现Rv2779c在营养不良的结核分枝杆菌模型中，该