一种测定烟草中噁霉灵残留物的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114878727A(43)申请公布日2022.08.09(21)申请号202210485578.5(22)申请日2022.05.06(71)申请人合肥高尔生命健康科学研究院有限公司地址230088安徽省合肥市高新区创新大道2800号创新产业园二期G4楼D区6楼(72)发明人韩枫陈碧云唐健锋(74)专利代理机构北京中知星原知识产权代理事务所(普通合伙)11868专利代理师艾变开(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/02(2006.01)G01N30/72(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称一种测定烟草中噁霉灵残留物的方法(57)摘要本发明提供了一种测定烟草中噁霉灵残留物的方法，包括如下步骤：萃取：将待测样加入溶有内标物的提取液中，调节pH至8‑9，涡旋混合振荡，超声提取；分配：向上一步混合物中加入哌嗪衍生物、盐，混合至均匀，调节pH至4‑6，涡旋混合振荡，离心，留取上清液；萃取步骤提取液为乙腈、端氨基树状大分子溶液的混合物，通过控制pH为碱性，利用树状大分子、噁霉灵分子间的氢键作用进行分子自组装，增大噁霉灵在提取液中的溶解性，使烟草中的噁霉灵被充分提取出来；分配步骤通过调节pH为酸性破坏自组装结构，在哌嗪衍生物和盐的作用下使杂质进入水相，噁霉灵进入有机相，以此提高噁霉灵的提取分离效率，保证噁霉灵残留检测的准确性、精度和稳定性。CN114878727ACN114878727A权利要求书1/2页1.一种测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)清洁：将烟草去除泥土及腐败根叶，烘干至恒重，粉碎，备用；2)萃取：将步骤1)所得物质加入溶有内标物的提取液中，调节pH至8‑9，涡旋混合振荡，超声提取；3)分配：向步骤2)混合物中加入哌嗪衍生物、盐，混合至均匀，调节pH至4‑6，涡旋混合振荡，离心，留取上清液；4)净化：取步骤3)所得上清液加至离心管中，加入盐、净化剂，涡旋混合振荡，离心，留取上清液，过滤，得净化液，备用；5)衍生：遮光条件下，向步骤4)所得净化液中加入缓冲液调节pH至9‑11，加入丹磺酰氯溶液，混合均匀后，室温遮光静置反应，反应结束后加入盐酸甲胺溶液涡旋混匀，静置至不再有沉淀产生，取上清液过滤，备用；6)检测分析：采用液相色谱‑串联质谱法测定噁霉灵衍生物的浓度，保留时间和离子对定性；采用同位素内标法，标准曲线定量；步骤2)所述提取液为乙腈、端氨基树状大分子溶液的混合物。2.如权利要求1所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，步骤2)所述提取液为乙腈、端氨基树状大分子溶液按照体积比为2:0.15‑0.25的混合物。3.如权利要求1所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，步骤2)所述提取液的用量为步骤1)所得烟草重量的2‑6倍，所述端氨基树状大分子为3‑8代，所述端氨基树状大分子溶液的浓度为3‑6wt％，所述端氨基树状大分子选自聚酰胺‑胺、聚丙烯亚胺中的一种或两种的组合，所述端氨基树状大分子溶液的溶剂为甲醇；进一步地，步骤2)所述内标物为噁霉灵‑D3，纯度>99.5％，提取液中内标物的浓度为0.005‑0.02mg/L。4.如权利要求1所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，步骤3)所述哌嗪衍生物的添加量为步骤2)所得混合物的5‑10wt％，所述盐的添加量为步骤2)所得混合物的20‑25wt％，所述盐选自硫酸镁、氯化钠、硫酸钠、醋酸钠、氯乙酸钠中的一种或两种及以上的组合。5.如权利要求1所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，步骤4)所述上清液、盐与净化剂的重量比为10:1‑0.7:1‑1.3，所述盐包括硫酸镁，所述净化剂选自乙二胺‑N‑丙基硅烷(PSA)、石墨化碳(GCB)、C18中的一种或两种及以上的组合。6.如权利要求1所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，步骤5)所述缓冲液的pH为9‑11，所述缓冲液包括碳酸钠‑碳酸氢钠缓冲液；所述丹磺酰氯溶液的浓度为1‑2g/mL，溶剂为乙腈；所述净化液、丹磺酰氯溶液的体积比为1:0.8‑1.3，所述盐酸甲胺溶液的用量为净化液体积的1/10‑1/12，所述盐酸甲胺溶液的溶剂为水，浓度为15‑25mg/L。7.如权利要求1所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，步骤3)中所述哌嗪衍生物由醛基吡啶类化合物的醛基和哌嗪类化合物上的氨基发生席夫碱反应制得，所述醛基吡啶类化合物和哌嗪类化合物的摩尔比为1:0.8‑0.95。8.如权利要求7所述测定烟草中噁霉灵残留物的方法，其特征在于，所述醛基吡啶类化合物选自1‑吡啶‑3‑基‑1H‑吡咯‑2‑甲醛、1‑吡啶‑4‑基‑1H‑吡咯‑2‑甲醛、1‑(2‑吡啶基)‑1H吡咯‑2‑甲