一种用于血液样本的菌体核酸快速提取试剂盒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115505590A(43)申请公布日2022.12.23(21)申请号202211260547.6(22)申请日2022.10.14(71)申请人领航基因科技（杭州）有限公司地址310000浙江省杭州市萧山区南阳街道横蓬园区红山工业区(72)发明人夏江高学娟(74)专利代理机构杭州汇和信专利代理有限公司33475专利代理师周竑(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)权利要求书1页说明书7页附图4页(54)发明名称一种用于血液样本的菌体核酸快速提取试剂盒及其应用(57)摘要本发明提供一种用于血液样本的菌体核酸快速提取试剂盒及其应用，利用红细胞裂解液裂解全血样本中的红细胞后，通过离心使菌体和白细胞进入第一沉淀，在获取第一沉淀弃上清的同时去除大量的血红蛋白。再通过向第一沉淀加入适量的去污剂SDS，以除去剩余的血红蛋白的同时也除去残留的有机物小分子，再离心弃上清的同时去除大量的SDS，再使用PBS冲洗去除残留SDS，后加入CHELX高速震荡，使用物理破壁的方法使沉淀中菌体里的核酸释放出来，再通过加热使菌体释放出的蛋白变性，离心除去沉淀，只有水溶液的核酸和少部分的无机盐离子留在上清中。可在低成本的前提下快速地提取血液样本中的菌体的核酸，且核酸提取效率高。CN115505590ACN115505590A权利要求书1/1页1.一种用于血液样本的菌体核酸快速提取试剂盒，其特征在于，包括：用于裂解红细胞的红细胞裂解液；PBS；SDS，其中所述SDS的终体积为0‑0.03％；无菌水；chelx。2.一种用于血液样本的菌体核酸快速提取方法，其特征在于，包括:取待测的全血样本，离心弃上清液后得到血细胞沉淀；往所述血细胞沉淀中加入多倍体积量的红细胞裂解液后静置，离心弃上清液后得到第一沉淀；往第一沉淀内加入PBS和终体积为0‑0.03％的SDS后充分混合后，弃上清得到第二沉淀；使用PBS清洗第二沉淀后加入无菌水和chelx后高速震荡一段时间得到第一混合液；高温加热所述第一混合液后离心取上清液。3.根据权利要求2所述的用于血液样本的菌体核酸快速提取方法，其特征在于，SDS的终浓度为0.015％。4.根据权利要求2所述的用于血液样本的菌体核酸快速提取方法，其特征在于，待测的全血样本为人体的全血样本。5.根据权利要求2所述的用于血液样本的菌体核酸快速提取方法，其特征在于，往所述血细胞沉淀中加入3倍体积的红细胞裂解液，往第一沉淀中加入1mlPBS并加入终体积为0.015％的SDS。6.根据权利要求2所述的用于血液样本的菌体核酸快速提取方法，其特征在于，在去杂后的第二沉淀中加入50ul无菌水和50ulchelx，高速震荡8分钟得到第一混合液。7.根据权利要求2所述的用于血液样本的菌体核酸快速提取方法，其特征在于，菌体包括白色念球菌、烟曲霉的孢子、新型隐球菌以及肠球菌和链球菌。8.一种用于血液样本的菌体核酸快速提取方法的应用，其特征在于，用于检测血流感染的全血样本中的菌体。2CN115505590A说明书1/7页一种用于血液样本的菌体核酸快速提取试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明涉及核酸提取领域，特别涉及一种用于血液样本的菌体核酸快速提取试剂盒及其应用。背景技术[0002]脓毒症为机体对感染产生失调的宿主反应，导致危害器官功能障碍甚至生命健康的临床综合征，是目前导致患者死亡的首要原因。2016年Fleischmann等发表的系统综述显示，高收入国家和地区脓毒症和严重脓毒症的发病率分别为437/10万和270/10万。据此推算，全球每年新发脓毒症患者3150万例，死亡530万例，脓毒症已成为严重的公共卫生负担。[0003]血培养是当前血流感染致病菌检测的金标准，但由于血液中病原微生物含量极低(低至1CFU/mL)，结合抗生素使用等原因造成血培养的阳性率远低于预期；另外血培养的培养及病原鉴定平均需要2‑3天，再考虑药敏鉴定等过程导致检测的报告时间更长、除此之外，血培养还存在采血量多、易污染、复合菌感染检出率低等限制性因素，导致现有的血培养方式不能获得准确的诊断结果，或因检测周期长而导致病患在获得检验报告的过程中就已经错过最佳治疗时机。所以临床上迫切需要一种快速、准确的检测方法来及时且高效地明确致病菌，以配合及时、针对性的治疗方案提高血流感染疗效。[0004]如qPCR和ddPCR检测等分子诊断等方法拥有灵敏度和特异性高、耗时短等优点，目前已逐渐取代原有方法用于血流感染的诊断。由于血液中含有大量的红细胞和白细胞，全血提取不仅会增加大量的人背景基因，而且会引进大量的血红蛋白，增加核酸提取难度。目前用于血流感染的分子诊断的核酸主要血清游离DNA，但是