用于分离γδT细胞的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115667501A(43)申请公布日2023.01.31(21)申请号202180035561.3(74)专利代理机构北京坤瑞律师事务所11494(22)申请日2021.05.12专利代理师封新琴(30)优先权数据(51)Int.Cl.2006989.42020.05.12GBC12N5/0783(2010.01)C12N5/00(2006.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日C12N5/071(2010.01)2022.11.15A61K35/12(2015.01)(86)PCT国际申请的申请数据A01N1/02(2006.01)PCT/GB2021/0511442021.05.12(87)PCT国际申请的公布数据WO2021/229226EN2021.11.18(71)申请人伽玛德治疗有限公司地址英国伦敦(72)发明人M·达尔齐尔A·赫顿S·奥法雷尔O·努斯鲍默权利要求书3页说明书34页附图11页(54)发明名称用于分离γδT细胞的方法(57)摘要本发明涉及用于分离非造血组织驻留淋巴细胞，特别是γδT细胞的方法。此类γδT细胞包括非Vδ2细胞，例如Vδ1、Vδ3和Vδ5细胞，并且此类非造血组织包括皮肤和肠道。应当理解，此类分离的非造血组织驻留淋巴细胞在过继性T细胞疗法、嵌合受体疗法等中具有很大的用途。还提供了用于扩增分离的组织驻留淋巴细胞的方法，特别是用于分离和扩增γδT细胞的方法。本发明还涉及通过本文所述的方法产生的单个细胞和细胞群体。CN115667501ACN115667501A权利要求书1/3页1.一种用于从非造血组织样品中分离淋巴细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(i)在存在白介素1β(IL‑1β)的情况下培养所述非造血组织样品；和(ii)从所述非造血组织样品中收集培养的淋巴细胞群体。2.一种用于从非造血组织样品中分离γδT细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(i)在存在IL‑1β的情况下培养所述非造血组织样品；和(ii)从所述非造血组织样品中收集培养的γδT细胞群体。3.根据任一前述权利要求所述的方法，其中步骤(i)还包括在存在白介素2(IL‑2)和白介素15(IL‑15)的情况下培养所述非造血组织样品。4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中步骤(i)还包括在存在白介素4(IL‑4)和/或干扰素γ(IFN‑γ)的情况下培养所述非造血组织样品。5.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述培养是在不存在白介素21(IL‑21)的情况下进行的。6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述培养是在存在浓度为15ng/mL与25ng/mL之间，诸如18至20ng/ml的白介素21(IL‑21)的情况下进行的。7.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述非造血组织样品在含有血清或血浆的培养基中培养。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述非造血组织在含有2.5％人血浆的培养基中培养。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述非造血组织在含有10％人AB血清的培养基中培养。10.根据任一前述权利要求所述的方法，其中在培养至少7天后收集所述淋巴细胞或γδT细胞。11.根据任一前述权利要求所述的方法，其中在培养至少14天后收集所述淋巴细胞或γδT细胞。12.根据任一前述权利要求所述的方法，其中在培养35天前收集所述淋巴细胞或γδT细胞。13.根据任一前述权利要求所述的方法，其中在培养19天后收集所述淋巴细胞或γδT细胞。14.根据任一前述权利要求所述的方法，其中在培养21天后收集所述淋巴细胞或γδT细胞。15.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述非造血组织样品是完整的活检物。16.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述非造血组织样品是皮肤。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述皮肤样品包括表皮层和真皮层。18.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述非造血组织样品是肠道或胃肠道。19.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述非造血组织样品已从人体获得。20.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述方法在包括透气材料的容器中进行。21.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述分离的淋巴细胞群体或γδT细胞群体包括Vδ1T细胞群体。22.根据权利要求21所述的方法，其中低于80％的所述分离的Vδ1T细胞群体表达2CN115667501A权利要求书2/3页CD45RA，诸如低于30％的所述分离的Vδ1T细胞群体表达CD45RA。23.根据权利要求21或22所述的方法，其中低于10％的所述分离的Vδ1T细胞群体表达NKG2A。24.根据任一前述权利要求所述的方法，其还包括扩增所述分离的淋巴细胞群体或γδT细胞群体。25.一种用于从非造血组织样品中分离淋巴细